具有人参皂苷Rb1转化能力菌株的筛选与鉴定

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人参皂苷因其糖苷键的变化而衍生出很多种类的皂苷,近年来人们越来越重视皂苷成分的药用价值,而常见皂苷的转化、生成的稀有皂苷的研究及其生理活性、药用价值则更是备受关注,具有很好的发展前景。  本文选用从泡菜汁中分离出的几十种微生物菌株来进行人参皂苷Rb1的转化,通过与标准品的比对,薄层色谱法(TLC)分析显示能转化成人参皂苷Rb1为其他稀有皂苷的菌株有13种,本文选取转化能力较强3种菌株进行发酵并对菌株进行鉴定。  对三种菌株的最佳培养条件和发酵条件进行了探索,培养条件的优化利用菌体浓度来表征,而最佳发酵条件是通过测定酶活力来体现,测定方法是采用了测定β-葡萄糖苷酶的活力的方法,通过测量以pNPG为底物的水解酶分解成pNP及葡萄糖,实验结果表明:菌株MC02、MC04和DR06的最佳培养条件都是在MRS培养基上,置于37oC恒温培养箱中培养4h~6h,培养基的pH值调至6.5~8.0;最佳发酵过程的条件三种菌株在振荡培养箱中用30oC,反应体系pH值在6.0~7.0,酶活力最强的反应时间是72h。  利用高效液相色谱法定性分析了各菌株的转化产物。其中菌株MC02在培养24h时生成人参皂苷Rd和F2,48h后培养液中出现人参皂苷C-K,72h以后完全转化成人参皂苷C-K;菌株MC04在培养24h的菌液能转化人参皂苷Rb1生成人参皂苷Rd和七叶胆苷GXVII,48h后GXVII逐渐消失并伴随着出现人参皂苷C-K,在72h以后也完全转化为人参皂苷C-K;菌株DR06在24h的时候生成人参皂苷Rd、七叶胆苷GXVII和人参皂苷F2,48h以后有人参皂苷的C-K的生成,72h以后完全转化生成C-K并没有其他人参皂苷成分检出。  利用PCR技术,扩增了菌株的16S rRNA,并通过在基因库进行比对初步鉴定出菌株。菌株MC02与 Leuconostoc citreum IH22 AF111949.1菌株相似度为98%;菌株MC04与Leuconostoc mesenteroides FJ655776.1相似度为98%;菌株DR06与Lactobaci llus brevis EF120367相似度为99%。
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