实验目的：　　使用边缘功能化球磨法一步制备生物分子（多肽）修饰的石墨烯（TG）纳米材料，以传统化疗药物丝裂霉素 C（MMC）为模型，针对眼部恶性肿瘤—脉络膜黑色素瘤，构建对肿瘤具有高度核靶向性的新型纳米载药体系多肽石墨烯（TG-MMC）。以实现将抗肿瘤药物直接递送至肿瘤细胞的细胞核内，达到选择性杀伤肿瘤细胞的目的，从而有效改善传统化疗药物无靶向性、副作用大的缺陷。　　实验方法：　　通过边缘功能化球磨法将TAT多肽和石墨粉以一定的比例混合球磨，一步制备获得多肽石墨烯；通过酰胺共价键接载丝裂霉素C，构建TG-MMC纳米载药体系。采用紫外光谱、傅里叶红外光谱、拉曼光谱、原子力显微镜等多种表征技术确认 TG-MMC的成功合成。将 TG-MMC与正常眼细胞系（ARPE-19）和肿瘤细胞系（OCM-1）共培养，检测纳米载药体系对肿瘤细胞的靶向性和杀伤性。通过透射电子显微镜（TEM）和共聚焦显微镜（CLSM）进一步确认所制备的纳米材料TG对肿瘤细胞具有较明显的核靶向性。　　实验结果：　　1)材料表征：原子力显微镜、扫描电子显微镜等表征手段证明一步法球磨获得平均厚度约为0.7 nm的单层片状石墨烯，并可见边缘被TAT多肽分子功能化；拉曼光谱显示产物具有TAT多肽的特征峰，且具有石墨烯明显的特征峰D峰（1362cm-1）G峰（1609cm-1）和2D峰（2708cm-1）。从紫外光谱、红外光谱等表征结果证实 TG-MMC体系构建成功，并计算得到 TG-MMC中MMC的载药率为21.6％，包封率为54.8%。　　2)细胞毒性测试：采用CCK-8法检测了所制备的TG对于视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）的细胞毒性，50μg/ml浓度的材料作用于细胞72小时，细胞存活率达90%以上，显示了TG良好的生物相容性，为TG作为纳米载药体系的制备提供了保障。　　3)核靶向性检测：分别用含有TG的培养液培养ARPE-19细胞和OCM-1细胞，在不同时间点洗去材料，固定细胞后分别用 TEM和共聚焦显微镜观察，发现纳米材料可以在6h后分布于正常细胞和肿瘤细胞内，并且在36h后开始代谢。在肿瘤细胞的细胞核内也发现有纳米材料分布，但是并未在正常细胞的细胞核内发现纳米材料，说明TG材料具有对肿瘤细胞的特异核靶向性。　　4) Transwell共培养：分别用不同浓度的TG-MMC对ARPE-19细胞和OCM-1细胞进行共培养，发现不同时间点载药体系对肿瘤细胞的杀伤性都远远大于正常细胞；对照组采用单纯的MMC抗肿瘤药物共培养两种细胞，发现药物并没有靶向性，在相同浓度下对ARPE-19细胞和OCM-1的杀伤性基本相同，表明TG的存在，是载药体系具有肿瘤细胞靶向性的决定因素。　　实验结论：　　本论文以边缘功能化球磨法制备获得了原子厚度的多肽石墨烯，简化了石墨烯的制备及相应的生物分子改性过程，将石墨烯的剥离、生物分子的改性、及肿瘤高靶向性等多个繁琐过程简化为高效简便的一步法。同时所有反应均在常温常压下进行，没有使用任何的有毒化学试剂，相较传统方式更为环保高效，所得产物具有良好的生物相容性以及载药性能，且具备对肿瘤细胞具有明显的核靶向性，是一种非常理想的抗肿瘤药物载体。进一步将载药体系通过Transwell模板与肿瘤细胞及正常细胞共培养，发现TG-MMC对于肿瘤细胞具有高靶向性，可以选择性杀伤肿瘤细胞，减小了对正常细胞的伤害，为药物抗癌的发展提供新的动力和方法。