目的:本文通过检测T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(T cell immunoglobulin mucin domain-3,Tim-3)在鼻咽癌患者外周血及肿瘤组织中NK细胞上的表达情况、程序性细胞死亡蛋白-1(programmed cell death protein 1,PD-1)在鼻咽癌患者外周血中NK细胞上的表达情况,分析它们与肿瘤临床分期的关系,探讨NK细胞上Tim-3、PD-1在鼻咽癌发生发展过程中的作用,为鼻咽癌的免疫治疗提供实验依据。方法:1、桂林医学院附属医院2019年8月-2019年12月新确诊为鼻咽癌的患者30例,对照组为年龄、性别与病例组无明显差异的22例健康体检者。2、应用流式细胞技术检测鼻咽癌患者外周血NK细胞百分比以及Tim-3、PD-1在NK细胞上的表达情况;组织免疫荧光双染检测鼻咽癌患者肿瘤组织Tim-3、CD56表达情况;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测外周血细胞因子IFN-γ和TNF-α浓度。3、收集实验组患者及对照组正常人的临床病例资料,包括性别、年龄、吸烟饮酒史、临床分期及淋巴结转移情况。临床分期参考美国癌症联合委员会(AJCC)第八版分期标准。4、实验数据均采用SPSS23.0版软件和Graphpad prism 5.0统计软件进行处理。鼻咽癌患者和对照组NK数量以及Tim-3、PD-1在NK细胞上的表达比例均用百分比表示,正态分布资料均采用均值±标准差(x±s)表示,用t检验比较组间差异,P<0.05为差异具有统计学意义,非正态分布资料用非参数检验,以中位数表示,P<0.05为差异具有统计学意义。比较鼻咽癌肿瘤组织和正常鼻咽部上皮组织免疫荧光染色中CD56和Tim-3的荧光分布密度和表达水平时,采用Fisher’s确切概率法评估NPC和NPE组间荧光强度差异,两因子之间的相关性应用Spearman等级相关性分析,P<0.05为差异具有统计学意义。结果:1、Tim-3在鼻咽癌患者外周血和肿瘤组织中NK细胞上的表达。(1)鼻咽癌患者和健康人外周血中NK细胞的百分比差异没有统计学意义(P=0.899);Ⅰ-Ⅲ期和ⅣA-ⅣB期鼻咽癌患者外周血NK细胞百分比差异没有统计学意义(P=0.937)。(2)Tim-3在鼻咽癌患者和健康人外周血中NK细胞上表达增加,差异有明显统计学意义(P=0.0307);Ⅰ-Ⅲ期和ⅣA-ⅣB期鼻咽癌患者外周血Tim-3+NK细胞百分比差异没有统计学意义(P=0.109)。(3)CD56+NK细胞在鼻咽癌患者肿瘤组织浸润增加(P=0.045);Tim-3+CD56+NK细胞在鼻咽癌患肿瘤组织增加(P=0.025),差异有统计学意义。(4)鼻咽癌患者和健康人外周血相比IFN-γ浓度下降,差异有显著统计学意义(P<0.0001)。TNF-α浓度差异没有统计学意义(P=0.4462)。(5)经PHA刺激培养后,鼻咽癌患者和健康人外周血相比IFN-γ浓度下降,差异有显著统计学意义(P=0.0009)。TNF-α浓度差异没有统计学意义(P=0.0525)。2、PD-1在鼻咽癌患者外周血NK细胞上的表达。鼻咽癌患者和正常对照者外周血PD-1+CD3-CD56+细胞百分比有显著统计学意义(P=0.0258);Ⅰ-Ⅲ期和ⅣA-ⅣB期鼻咽癌患者外周血PD-1+CD3-CD56+细胞百分比差异没有统计学意义(P=0.1731)。结论:1、Tim-3在鼻咽癌患者外周血和肿瘤组织NK细胞上高表达,NK细胞分泌抗肿瘤细胞因子功能下降,我们推测Tim-3高表达可能是鼻咽癌患者NK细胞功能受损的标志物,参与鼻咽癌的发生发展,因此,靶向NK细胞上Tim-3表达可能成为鼻咽癌免疫治疗新途径和靶点。2、PD-1在鼻咽癌患者外周血NK细胞上高表达,NK细胞分泌抗肿瘤细胞因子功能下降,我们推测PD-1高表达可能是鼻咽癌患者NK细胞功能受损的标志物,参与鼻咽癌的发生和发展,与Tim-3联合阻断有望成为鼻咽癌免疫治疗的新靶点。3、我们的研究还不够深入,存在一定的局限性,Tim-3、PD-1高表达对于NK细胞功能影响的还需进一步深入研究和确定,如开展体外Tim-3、PD-1阻断实验,有效逆转鼻咽癌患者NK细胞的免疫调节功能,为鼻咽癌患者免疫治疗新途径和靶点提供进一步的依据。