Cbcbf、Cbice53等抗冻相关基因的克隆及功能验证

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本研究在荠菜还克隆到了一个新的ICE1基因(Database Accession No.:AY506804),该基因(Cbice53)全长cDNA为1811bp,含有一个1476bp的开放阅读框(ORF),预测编码一个492个氨基酸的蛋白。预测的CbICE53蛋白包括一个潜在的螺旋-环-螺旋结构,一个核定位序列(NLS)和几个其它的结构域。生物信息学分析显示Cbice53与拟南芥的ICE1基因十分相似。非生物胁迫分析及冷适应分析表明Cbice53的表达与冷诱导和盐诱导相关,并且受ABA的诱导,与干旱诱导不相关。 此外,本研究在荠菜中克隆了两个新的抗冻相关基因Cbcax51(Database AccessionNo.:AY660870)和Cbrci35(Database Accession No.:AY566573)。Cbcax51全长cDNA为1754bp,含有一个1398bp的开放阅读框(ORF),编码一个有466个氨基酸的蛋白质;Cbrci35全长cDNA为1300bp,含有一个978bp的开放阅读框(ORF),编码一个有326个氨基酸的蛋白质。 分析结果表明荠菜中存在Cbcbf25、Cbcbf、Cbice53等与抗冻相关的基因,发现Cbice53是组成性表达,同时其表达受盐及ABA的诱导,推测在荠菜中存在Cbice53激活Cbcbf25和Cbcbf的转录,进而激活下游抗冻基因的转录的基因表达调控途径,即存在与拟南芥相类似的CBF基因表达调控途径。在成功地构建植物表达载体之后,采用冻融法成功地将重组质粒转化到了根癌农杆菌菌株EHA105中,采用农杆菌介导的烟草叶盘转化法,将目的基因转入烟草中,在诱导生根后对转基因植株进行PCR检测,鉴定出阳性植株,为进一步的功能验证提供了基础。
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