研究表明，肿瘤的发生发展并非由肿瘤细胞单方面决定的，而是由肿瘤细胞和间质两者相互作用所构成的肿瘤-宿主界面微环境的平衡状态所决定的。癌相关成纤维细胞（carcinoma-associated-fibro blasts，CAFs）是肿瘤-宿主界面微环境中最重要的宿主细胞，它通过分泌多种生物信息与肿瘤微环境中的各组成成分发生交互作用，从而影响肿瘤的发生发展。癌相关成纤维细胞又称为肿瘤相关成纤维细胞（tumor-associated fibroblas，TAFs）、肿瘤间质成纤维细胞（tumor stroma fibroblasts）等，是指肿瘤间质中的成纤维细胞群。与正常成纤维细胞相比，CAFs处于活化状态，在形态结构、生长方式、增殖活性、运动能力以及分泌功能等方面均发生了显著变化，从而对肿瘤微环境内的肿瘤细胞、周围基质、其他宿主细胞产生重要影响。大量实验研究表明，CAFs在肿瘤发生的过程中起着至关重要的作用，抑制CAFs可以间接地抑制肿瘤组织的发生。重组灵芝免疫调节蛋白(recombinant Ganoderma lucidum immunoregulatoryprotein)属于真菌免疫调节蛋白(Fips)家族，是从赤灵芝菌丝体中提取的，经重组表达的一种蛋白质。以往研究表明，rLZ-8具有抑制小鼠系统性过敏反应、刺激人类外周血淋巴细胞增殖和IL-2、TNF-α和IFN-β等细胞因子产生的免疫学活性。研究报道，rLZ-8对H22肝癌细胞和肝癌细胞株S180等均有明显抑制作用，但针对CAFs的杀伤作用及作用机制的研究尚无报道。本课题将研究rLZ-8对H22小鼠肝癌细胞动物模型中CAFs体内、体外的影响，探讨rLZ-8对癌相关成纤维细胞的抑制作用。实验方法体内实验：应用H22小鼠肝癌细胞接种小鼠腹腔7天后，取其腹水。以适量无菌生理盐水稀释成瘤细胞悬液，细胞计数为107ml-1，小鼠右腋窝皮下接种0.2ml。接种24h后小鼠分组：模型组、rLZ-8低剂量治疗组（0.5mg kg-1）、rLZ-8中剂量治疗组（1mg kg-1）、rLZ-8高剂量治疗组（2mg kg-1）。每组10只。模型组给予生理盐水0.2ml只-1d-1，腹腔注射；rLZ-8治疗组分别给予相应剂量腹腔注射，0.2ml只-1d-1。连续10天。在停药次日，处死小鼠，解剖取出瘤块。分离提取各组肿瘤组织中CAFs。体外实验：分离提取上述模型组肿瘤组织中CAFs，根据培养基中所含rLZ-8浓度分为对照组（0μg/ml）、低剂量组（2μg/ml）、中剂量组（5μg/ml）和高剂量组（10μg/ml）。rLZ-8作用时间分别为24h、48h、72h。MTT方法检测体外实验各组CAFs细胞增殖活性，Western-Blot和RT-PCR方法检测α-SMA和Vimentin蛋白和基因表达。通过观察rLZ-8对CAFs的抑制作用，为rLZ-8抑制CAFs的生物活性从而降低肿瘤细胞的生长侵袭等方面提供科学依据和线索。实验结果：体内实验：1.应用小鼠H22肝癌细胞建立小鼠肝癌模型。成功分离并鉴定小鼠CAFs；2.与对照组相比，rLZ-8低、中、高三个剂量组中CAFs α-SMA和Vimentin蛋白表达量明显降低（P<0.01）。体外实验：1.细胞增殖活力检测：rLZ-8作用24h、48h和72h，与对照组比较，rLZ-8低、中、高剂量组CAFS增殖活性均显著降低（P<0.01）；其细胞相对增殖率也显著降低（P<0.01）；2.Western-Blot方法检测CAFs中α-SMA和Vimentin蛋白的表达，发现rLZ-8低剂量组中α-SMA表达量与对照组相比无显著性差异，中、高两个剂量组α-SMA无表达；Vimentin表达在rLZ-8低剂量组和中剂量组中与对照组相比无明显差异，但在高剂量组中表达显著性降低（P<0.01）；3.Real-time PCR检测CAFs中α-SMA和Vimentin基因表达。结果显示，rLZ-8中、高两个剂量组中α-SMA基因表达量与对照组相比均显著降低（P<0.01)；rLZ-8低、中两个剂量组Vimentin基因表达量与对照组相比显著性增加，高剂量组中Vimentin基因表达量显著性降低（P<0.01)。本研究的创新之处在于首次从小鼠H22肝癌模型中提取CAFs，并首次应用rLZ-8进行体内和体外的干预实验。结果发现rLZ-8可明显抑制CAFs的细胞增殖活力，并明显降低CAFs中标志物α-SMA和Vimentin的蛋白和基因表达。本研究将为肿瘤发生和逆转机制以及从肿瘤间质角度进行肿瘤的治疗提供新的科学线索和科学依据。