罗伊氏乳杆菌SH 23在模拟胃肠液培养下的功能特性研究

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乳酸菌是一种广泛存在于人体及动物胃肠道内的微生物,具有维持肠道菌群平衡和调节免疫等各项生理功能。发挥这些作用的前提是乳酸菌能够在恶劣的胃肠道环境中生存并且定植于上皮细胞。因此,系统地了解乳酸菌在胃肠道环境下的应激反应及黏附机制是深入探索乳酸菌潜在功能的基础。本文研究了罗伊氏乳杆菌SH 23在胃肠液培养后的黏附特性及形态变化,通过转录组学和蛋白组学全面了解其在胃肠液下的适应机制及黏附机制。将罗伊氏乳杆菌与黏附相关的LPx TG基序蛋白进行克隆表达,初步研究其潜在的益生特性。从而为深入探索罗伊氏乳杆菌适应肠道粘膜屏障的黏附机制提供了基本信息。主要的研究结果如下:(1)通过不同乳酸菌菌株间的胃肠耐受分析,发现罗伊氏乳杆菌SH 23相对于其他菌株在胃肠液刺激下显示出较好的耐受特性,但同时也发现胃肠液影响罗伊氏乳杆菌SH 23相关表象指标,如胃肠液培养下各项黏附指标的下降。从扫描电镜和透射电镜也可以发现胃肠液使罗伊氏乳杆菌细胞的外观受到了一定程度的破坏。这些数据表明体外模拟的胃肠液会给罗伊氏乳杆菌带来一定的影响。(2)通过转录组学分析胃肠液培养前后罗伊氏乳杆菌基因的表达变化,观察到的变化涉及细胞膜、代谢过程、常见应激反应、调节系统和转运体等相关基因。其中与黏蛋白结合蛋白(Mub)相关的两个黏附蛋白表达基因出现显著的上调,如LPx TG细胞壁锚定结构域蛋白(LREU23DRAFT_5180和LREU23DRAFT_4529)。(3)通过蛋白组学进一步分析胃肠液培养前后罗伊氏乳杆菌表面蛋白的变化,主要包括烯醇化酶、延伸因子Tu、延伸因子P、Dna K、通用应激蛋白和热休克蛋白等黏附兼职功能蛋白、氨基酸ABC转运蛋白、LPx TG锚域表面蛋白和Mub蛋白,来初步分析罗伊氏乳杆菌为适应肠道粘膜的黏附机制。研究发现LPx TG锚域表面蛋白更加丰富,结果与转录组学数据一致,表明LPx TG结构蛋白能提高罗伊氏乳杆菌定植宿主的能力。(4)为探究LPx TG锚域表面蛋白存在的益生特性,使用体外重组表达方法,将LPx TG结构蛋白A4V07_06340(来自于蛋白组学)和Lreu23DRAFT_5180(来自于转录组学),通过表达载体在大肠杆菌中诱导表达。结果发现A4V07_06340蛋白可以提高罗伊氏乳杆菌对于Caco-2细胞的黏附率,当加入50μg/m L时,黏附率达到最大;同时也发现A4V07_06340蛋白能提升模拟胃肠液条件下罗伊氏乳杆菌的存活率。
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