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丹参(Salvia miltiorrhiza bge.)属于唇形科(Labiatae)鼠尾草属(Salvial)植物。该属约包括700-1050余种植物,遍布在全球温暖地带,主要分布于地中海地区和西亚。在我国该属植物约有78种,24个变种,8个变型,分布于全国各地,尤以西南地区居多。
中药丹参(Radix Et Rhizoma Salviae Miltiorrhizae)为丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根茎。为更全面地开发利用该植物资源,首先,本论文利用HPLC法测定了丹参不同部位中几种化学成分的含量;其次,以丹参须状细根(陕西商洛)为研究对象,利用星点设计-效应面法对其中有效成分的酶解工艺进行研究;再者,以植物化学理论和现代化学分离分析技术为基础,利用硅胶和聚酰胺柱层析、TLC、聚酰胺薄膜等分离检测方法,对丹参须状细根中的酚性成分进行了分离纯化;主要研究结果如下:
1.几种有效成分在丹参不同部位的分布特征首先,按四个不同部位将丹参植物样分为叶、茎、主根和须状细根。以丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B、二氢丹参酮I、丹参酮I和丹参酮IIA六种成分为对照品,利用HPLC法分别测定丹参四个部位中上述六种成分的含量。从各对照品和丹参四个不同部位六种成分的HPLC可以看出,丹参叶除检测出丹参素(0.0863%)和丹酚酸B(2.7989%)外,均未检测出其余四种成分;丹参茎中除检测出丹参素(0.0259%)、丹酚酸B(1.1450%)和丹参酮Ⅰ(0.0055%)外,均未检测出其余三种成分;丹参主根中未检测出原儿茶醛、二氢丹参酮I和丹参酮Ⅰ,丹参素、丹酚酸B和丹参酮ⅡA的含量分别为0.0265%、7.4760%和0.0012%;而在丹参须状细根中,丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B、二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA六种成分均被检测出,其中丹酚酸B和丹参酮Ⅰ含量较高,分别为10.9655%和0.1890%,其余四种成分含量较低:丹参素为0.0367%,原儿茶醛为0.0038%,二氢丹参酮Ⅰ为0.0033%,丹参酮ⅡA为0.0077%。以上结果表明:相比较于主根,以上六种成分在须状细根中的分布均存在量上的优势。
2.丹参须状细根有效成分酶法提取工艺首先,通过单因素试验研究了pH值、加酶量、酶解温度以及酶解时间对丹参须状细根有效成分收率的影响,得出pH值、加酶量和酶解温度对丹参须状细根有效成分收率的影响较大,而酶解时间各水平(0.5、1.0、1.5、2.0和2.5h)之间没有显著性差异;其次,通过星点实验设计一效应面法来优化对丹参须状细根有效成分收率的影响较大且作用不易预测的三个因素—pH、加酶量和酶解温度,结果表明,丹参须状细根中总丹参酮的最优纤维素酶酶解工艺参数为:纤维素酶用量84 mg·g-1须状细根,缓冲液pH=4.2,温度53℃;丹参须状细根中总丹酚酸的最优纤维素酶酶解工艺参数为:纤维索酶用量25mg·g-1须状细根,缓冲液pH=5.4,温度55℃。利用优选出的酶解工艺所得到的丹参须状细根提取液中总丹参酮和总丹酚酸的收率较非酶法分别提高了113.92%和30.64%,并且薄层检测表明纤维素酶酶解对提取液中的有效成分无质的影响;同时,建立的数学模型的复相关系数较高,并且通过检验,说明模型有较好的预测性。
3.丹参须状细根化学成分的分离纯化与结构鉴定应用柱层析(硅胶柱、聚酰胺柱和凝胶柱)和制备薄层层析等方法,对陕西天士力商洛丹参药源基地提供的丹参须状细根醇提物进行了分离、纯化研究,共分离得到了8个单体化合物,其编号和质量分别为:Ⅰ(2.5mgl)、Ⅱ(2.8mg)、Ⅲ(4.9rag)、Ⅳ(6.0mg)、Ⅴ(10.5mg)、Ⅵ(18.3mg)、Ⅶ(10.1mg)、Ⅷ(9mg)。经与标准对照品进行HPLC对照,确定化合物Ⅷ为丹参素;利用1H-NMR、13C-NMR、MS等现代波谱技术,鉴定出化合物Ⅶ为咖啡酸庚酯,化合物Ⅵ为异阿魏酸,其中咖啡酸庚酯为首次从丹参中分离得到。
本论文研究发现丹参须状细根中主要化学成分的含量高于主根,同时发现丹参地上部分也有较高的利用价值;纤维素酶法可以显著提高丹参须状细根中有效成分的溶出率,且薄层检测显示该方法对提取液中的成分无质的影响;最后,对其中的酚性成分进行了分离纯化。总之,对丹参资源的利用应根据实际应用目的给予全面考虑,以免造成资源浪费,从而达到全面地充分地开发利用丹参资源的目的。