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Leydig cells(LCs)是合成类固醇激素的主要细胞类型。在类固醇激素合成通路中,17β-羟基类固醇脱氢酶3(HSD17B3)发挥重要功能,该酶可催化雄烯二酮直接转化成睾酮(Testosterone)。目前已有研究证实类固醇合成通路相关基因突变、LCs的凋亡、炎症等因素均可引起睾酮合成出现异常,从而影响精子发生和雄性繁殖。本研究以猪为研究对象,通过群体遗传筛选出影响猪雄性生殖的重要候选基因Hsd17b3,并进一步研究猪Hsd17b3基因表达、功能及其表达调控。微小RNA(Micro RNA,mi RNA)广泛参与雄性繁殖调控,其中mi R-155(mi R-155-5p)作为一种炎症性mi RNA分子,提示其可能在睾丸炎症和雄性动物繁殖中发挥作用。目前关于猪mi R-155(ssc-mi R-155)在雄性繁殖领域的研究仍匮乏。本研究探究ssc-mi R-155对猪Hsd17b3的调控机制,对深入了解Hsd17b3在睾丸内细胞的睾酮合成及类固醇代谢过程中的作用具有重要参考意义。通过分子及细胞生物学技术,探索猪睾丸细胞中繁殖相关的ssc-mi R-155、Hsd17b3基因表达模式和分子机制;明确ssc-mi R-155和Hsd17b3基因调控雄性生殖的作用。最终为进一步研究雄性激素合成及代谢研究积累科学资料。1.Hsd17b3基因对猪睾丸形态学特征的影响利用q RT-PCR检测不同类型组织和不同来源细胞样本中Hsd17b3的表达,结果发现Hsd17b3基因在猪睾丸中丰度最高。通过基因克隆测序鉴定了猪睾丸中Hsd17b3基因主要表达的转录本序列信息。通过群体遗传学方法发现Hsd17b3基因启动子区域一段11 bp的indel与内含子区15 bp indel强连锁,并影响猪Hsd17b3的表达,这些indel位点与猪睾丸重显著相关(P<0.01)。这两个关键indel可作为潜在的分子标记应用于动物遗传育种工作。2.ssc-mi R-155与Hsd17b3基因的靶向关系研究生物信息学分析表明,ssc-mi R-155可靶向Hsd17b3且在不同物种间保守。通过q RT-PCR实验检测猪不同组织中ssc-mi R-155的表达量,发现ssc-mi R-155在多种组织中均有表达,其中ssc-mi R-155在附睾中的表达量较高。经过双荧光素酶报告系统验证发现ssc-mi R-155能够靶向猪Hsd17b3基因,且调控猪睾丸支持细胞系(ST)内源性Hsd17b3基因的表达。3.ssc-mi R-155在睾丸间质细胞中的功能研究通过q RT-PCR、Western blotting、TUNEL、Ed U和流式细胞术等实验方法发现:EDS处理睾丸间质细胞能够诱导细胞炎症反应和细胞凋亡,且引起ssc-mi R-155表达上调;过表达ssc-mi R-155能够诱导TM3细胞炎症反应和细胞凋亡,但对细胞增殖无影响;过表达ssc-mi R-155能够激活TM3细胞NF-κB/p-NF-κB信号通路,引起细胞炎症反应。综上,本研究发现了ssc-mi R-155可以靶向Hsd17b3基因,并诱导TM3细胞炎症反应和凋亡,为睾酮合成关键基因Hsd17b3的研究提供了科学资料,同时为解析sscmi R-155调控睾丸间质细胞的分子机制奠定基础。