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研究目的: 通过对普萘洛尔作用于人肺腺癌A549细胞后其基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达变化的研究,并分析这种变化与普萘洛尔浓度的关系,来探讨MMP-9成为肺癌治疗中的一个新靶点的可行性,为肺癌的靶向治疗提供一种新的思路。 研究方法: (1)体外培养人肺腺癌A549细胞。 (2)挑选生长状态良好且呈对数期生长的细胞,按照随机对照原则分成实验组(给药组)及对照组(空白组),对照组均给予含0ug/ml的普萘洛尔细胞培养液继续培养,实验组分别给予5个不同浓度的普萘洛尔细胞培养液处理,具体的浓度为:实验组1:2ug/ml,实验组2:4ug/ml,实验组3:8ug/ml,实验组4:16ug/ml,实验组5:20ug/ml,每个相同浓度的组内又分为三个小组,分别为培养后12h、24h及48h的小组,并为每个时间段的小组设置六个平行孔。 (3)培养完成后进行测定:将细胞培养液离心,取上清液,应用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(即ELISA法),测量各组细胞对应的人基质金属蛋白酶9(MMP-9)的水平。 实验结果: (1)显微镜下观察 各组细胞在经过含有不同浓度的普萘洛尔细胞培养液培养后:同一浓度下培养后12h及24h后生长状态及细胞密度无明显变化,但在培养48h后显微镜下观察培养液中有大量漂浮的死亡细胞;不同浓度培养时同一时间段细胞的生长状态及细胞密度无明显区别。 (2)生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定的结果 与对照组相比,5个实验组的细胞经过普萘洛尔细胞培养液培养后,人肺腺癌细胞株A549细胞MMP-9的表达水平下降,且培养后12h>培养后24h>培养后48h。并且经过统计学软件分析结果:P<0.05,说明普萘洛尔浓度与培养时间段这两个因素对所培养细胞MMP-9表达的影响有统计学意义; 实验组4(16ug/ml)与实验组5(20ug/ml)MMP-9的检测浓度降低尤为明显,且降低幅度实验组5>实验组4,而实验组1、2、3降低幅度小,组间比较P<0.05,差异有统计学意义,说明普萘洛尔浓度达到16ug/ml时对所培养细胞MMP-9的表达影响显著,可以作为一个界定浓度,对科研工作有一定的指导意义。 结论: (1)人肺腺癌细胞株A549细胞普遍表达MMP-9,MMP-9通过对细胞外基质中Ⅳ型胶原的特异性降解,影响肺肿瘤细胞的侵袭和转移能力,使肺癌发生肺内转移及其他部位转移的可能性增加。 (2)普萘洛尔影响体外培养人肺腺癌A549细胞MMP-9的表达,具体影响表现为抑制作用,根据MMP-9在体内的生物学作用,可以得出普萘洛尔有降低肿瘤细胞的侵袭和转移能力,从而减少肺癌的肺内转移及远处转移,为肺癌的靶向治疗提供了一种新思路。