【摘 要】
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该研究即针对Tat碱性结构域短肽,以分子生物学方法获得原核表达的Tat(48-6-aa) 及Tat(48-6-aa)与目的基因嵌合表达的融合蛋白;对这类融合型碱性结构域生肽作为胞内传递体系的
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该研究即针对Tat碱性结构域短肽,以分子生物学方法获得原核表达的Tat(48-6-aa) 及Tat(48-6-aa)与目的基因嵌合表达的融合蛋白;对这类融合型碱性结构域生肽作为胞内传递体系的可能性和应用性进行了初步研究.分别选择两种不同性质的外源目的蛋白:活细胞荧光染料增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和已知的细胞质定位的功能性蛋白Bcl-Xs.利用EGFP的荧光效应,以激光扫描共聚焦显微镜对靶细胞内绿色荧光的分布进行观察、定量,直接显示Tat短肽的穿膜功能和它对目的蛋白的引导效应:结果显示GST-Tat(48-60aa)-EGFP(GTG)处 理使靶细胞内的绿色荧光明显增强;缺乏Tat短肽的GST-EGFP(GG)对靶细胞内荧光强度无影 响,而仅有本底的显示.初步确定了以PCR合成、E.coli表达的Tat碱性结构短肽保持原有的自主穿膜性质,并具有引导融合的的目的蛋白EGFP进入细胞的功能.
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