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研究背景原因不明复发性流产(Unexplained Recurrent Spontaneous Abortion, URSA)是指与同一性伴侣连续发生2次或2次以上的自然流产,且不存在染色体、解剖、内分泌和自身免疫功能异常以及生殖道感染等病因。URSA的发生机制非常复杂,是妇产科领域一个很有临床价值的研究课题。近年来研究表明,许多不明原因复发性流产的发生与胎盘组织中血管增生平衡和胎儿血液供应不足有密切关系,血管内皮生长因子(vascular endothelial factor, VEGF)是最主要的促进血管形成的血管形成增生调节因子,在保持蜕膜组织中血管密度、有效血流量和维持胎儿营养供应上起重要作用。成功的妊娠依赖于胎盘良好的发育和生长,在胎盘植入和胎盘形成的过程中,血管的生成对于成功妊娠是非常关键的。sFlt (Soluble fms-like tyrosine kinase)为血管内皮生长因子受体的一种,由于它仅有胞外配体结合区,保留了与VEGF高亲和力的特性,其与VEGF结合后抑制其促血管生长作用。sFlt-1在先兆子痫、肿瘤等疾病中的作用已有较多研究成果,但在复发性流产的研究罕见。本研究探讨VEGF及sFlt-1与不明原因复发性流产发病的相关性及研究VEGF基因多态性与广西地区壮族人群复发性流产的相关发病风险,进一步阐明URSA发病机制,为URSA诊治提供理论基础及治疗前景。第一部分VEGF及其可溶性受体sflt-1与妊娠相关性研究目的检测正常未孕妇女及正常早孕妇女,不明原因复发性流产未孕妇女及不明原因复发性流产早孕妇女外周血中的sFlt-1及VEGF水平,探讨sFlt-1及VEGF与妊娠相关性；动态检测VEGF及sFlt-1在正常孕早期不同孕周外周血浓度,探讨sFlt-1及VEGF在孕早期不同孕周的浓度变化。方法选择正常未孕妇女、不明原因复发性流产未孕妇女及正常早孕妇女各50例,应用ELISA法检测各组外周血sFlt-1及VEGF,探讨sFlt-1及VEGF与妊娠相关性。正常妊娠妇女妊娠确诊后分别抽取孕4-6周；孕7-8周；9-10周；211-12周外周血,应用ELISA法监测不同孕周sFlt-1和VEGF水平浓度,探讨sFlt-1及VEGF在孕早期不同孕周浓度变化。结果1.不明原因复发性流产未孕组VEGF及sFlt-1水平分别为242.8±236.52026及878.56±837.1065,正常未孕组VEGF及sFlt-1水平分别为253.8277±137.0413及1587.001±1678.2486。两组VEGF及sFlt-1水平无显著性差异,p>0.05。2.正常早孕组与正常未孕组sFlt-1水平分别为3631.742±3000.0891；1587.001±1678.2486,正常怀孕组sflt水平高于正常未孕组,两者间差异有显著性差异(P<0.01),；正常早孕组与正常未孕组VEGF水平分别为969.64±696.9974；253.8277±137.0413,正常怀孕组VEGF水平高于正常未孕组,两者间差异有非常显著性差异(P<0.01)。3.正常孕早期,VEGF及sFlt-1在孕4-6周血清浓度高,特别是孕4周(2256.50±1995.09ng/L；11796.67±9916.08ng/L),随后下降波动在一定水平。结论VEGF及sFlt-1与妊娠有相关性,妊娠确诊即能检测到VEGF.sflt-1的表达,说明在绒毛发育早期,VEGF及sflt-1即可发挥作用,对整个妊娠进行调节,妊娠后两者水平升高；在孕早期,胚胎刚着床滋养细胞侵入浅,相对缺氧,导致sFlt-1及VEGF水平升高,VEGF及sFlt-1在孕4-6周血清浓度高,随着妊娠周数增加,滋养细胞逐渐侵入,相对缺氧现象逐渐改善,sFlt-1及VEGF水平下降至一定水平。第二部分VEGF及其可溶性受体sflt-1与不明原因复发性流产相关性研究目的研究URSA患者中VEGF及其可溶性受体sflt一1血清浓度及在绒毛组织中蛋白及基因表达情况,探讨VEGF及其可溶性受体sflt-1与复发性流产的相关性。方法前瞻性观察1124例不明原因复发性流产再孕患者,有35例URSA组患者胚胎停育,以35例正常早孕行人工流产术妇女的血清及绒毛作为对照组,应用ELISA法及免疫组织化学方法观察35例URSA患者胚胎刚停育(胚胎停育组)血清及绒毛中VEGF及sflt-1的蛋白表达情况；应用RT-PCR技术检测30例不明原因复发性流产患者及30例正常早孕妇女绒毛组织中的sFlt-1mRNA及VEGF-mRNA表达水平。结果1.对照组外周血中VEGF的水平为982.67±675.47ng/L:URSA组外周血中VEGF的水平为2637.50±2145.09ng/L.外周血中VEGF水平URSA组较对照组高,两者间差异有非常显著性差异(P<0.01)。2.对照组外周血中sFlt-1的水平为3540.67±2989.80ng/L:URSA组外周血中sFlt-1的水平为13796.67±11917.08ng/L,外周血中sFlt-1水平URSA组较对照组高,两者间差异有非常显著性差异(P<0.01)。3.不明原因复发性流产胎停育组绒毛组织中VEGF及sflt-1阳性染色(分别为81.25%和84.38%)较正常早孕组(分别为22%和28%)强,URSA组较正常早孕绒毛组织中VEGF及sflt-1蛋白表达水平高,两者间差异有显著性(P<0.05)。4.不明原因复发性自然流产组和正常早孕组绒毛组织中VEGF mRNA及sFlt-1mRNA表达的检测,不明原因复发性自然流产组较正常早孕组绒毛组织中sFlt-1mRNA表达高(分别为38.83±2.64及28.53±1.70),两者间差异有显著性差异(P<0.01)；不明原因复发性自然流产组较正常早孕组绒毛组织中sFlt-1mRNA表达高(分别为38.83±2.64及28.53±1.70),两者间差异有显著性差异(P<0.01)；结论1. URSA的发生与VEGF.sfl t-1具有相关性,VEGF.sfl t-1的升高导致流产发生。2.复发性自然流产患者血清及绒毛组织可溶性VEGF受体sFlt-1含量升高可能与早孕期滋养层绒毛发育过程中缺氧有关,孕早期缺氧,循环中sFlt-1的表达增加,造成循环中游离态VEGF水平降低,另外,sFlt-1高表达会拮抗VEGF促进血管生成的作用,影响滋养细胞增殖和内皮细胞功能,导致流产发生。第三部分VEGF基因多态性与广西地区壮族人群复发性流产的相关性研究目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)-2578C/A、-54G/A、-634G/A、-460C/T和+936C/T位点单核甘酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)与广西地区壮族URSA人群发性流产发病的关联性。方法应用PCR-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测URSA组120例和健康对照组120例的VEGF5个SNP位点基因型频率分布情况。结果VEGF-2578C/A、-1154G/A、-634G/C、-460C/T和+936C/T的SNP位点基因型和等位基因频率分布在病例组和对照组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论1.VEGF-2578C/A、-1154G/A、-634G/C、-460C/T和+936C/T位点的基因多态性可能与广西壮族人群不明原因复发性流产发病风险不相关。2.由于基因多态性位点在不同种族,不同人群中的作用不一致所致及VEGF基因的高度多态性,需要进一步加大样本量对不同种族人群进一步研究,从而全面了解广西人群中VEGF基因SNPs在URSA的易感性。