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金黄色葡萄球菌（金葡菌）是导致奶牛发生乳腺炎的主要病原菌之一。由于金葡菌侵入乳腺，粘附在乳腺上皮细胞是引起乳腺感染的重要步骤，阻断细菌-宿主细胞间的粘附是预防金葡菌感染的重要作用靶点。粘附素(MSCRAMMs)是一类菌体表面蛋白，能够识别粘附基质分子并且介导细菌粘附于宿主细胞。目前，已分离、鉴定了多种金葡菌黏附素，如凝集因子(ClfA/B)，纤维蛋白结合蛋白(FnBP A/B)，胶原结合蛋白(Cna)以及酪氨酸-丝氨酸富集蛋白(SdrC/D/E)等。为了筛选出我国奶牛主要养殖区乳房炎金葡菌的优势粘附素蛋白，为研究金葡菌疫苗的候选抗原提供基础，本研究对分离自我国产奶量居前十五位的省、市中牛源金葡菌进行了粘附基因调查。 对53个奶牛乳房炎金葡菌分离株的研究结果表明，不同地区分离到的金葡菌间粘附基因的可变串联重复序列存在较大的差异，含32个不同的基因型。虽然基因型众多，但统计结果显示53株菌中所有菌株都含有ClfA/B、FnbpA和Cna粘附基因。此外，90.6％的金葡菌含有SdrC和FnbpB基因，64.2％含有SdrD基因，86.8％含有SdrE基因。为确定金葡菌粘附素是否合适于作为疫苗组分，原核表达了其中的一个粘附素。扩增的ClfB N1-N3结构域片段与pET28a表达载体连接，成功构建原核表达载体pET28a-Truncated-C lfB，随后将该重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，成功诱导表达约55 kDa的Truncated-C lfB重组蛋白。Truncated-C lfB重组蛋白经亲和层析法、离子交换法和分子筛法对蛋白进行纯化，蛋白纯度达到了95％以上，排除了杂质对实验的干扰，利用纯化后的蛋白作为抗原制备了抗血清。三免后十日免疫血清IgG的效价高于1∶640，000。 为了检测上述血清是否具有吞噬调理作用，我们分离了新西兰大白兔外周血的多形核白细胞(PMN)，在体外观察了血清对PMN吞噬金葡菌是否具有促进作用。结果表明，免疫前血清预处理组PMN吞噬率为32.3±4.5％，Truncated-ClfB血清预处理组PMN吞噬率为41.3±6.7％，抗ClfB的血清可以显著提高PMN吞噬金葡菌的能力。 因此，本研究53个奶牛乳腺炎金葡菌分离株含32个不同的基因型，并且所有菌株都含有ClfA/B、 FnbpA和Cna粘附基因。此外，90.6％的金葡菌含有SdrC和FnbpB基因，64.2％含有SdrD基因，86.8％含有SdrE基因。成功构建了Truncated-ClfB并在大肠杆菌中表达Truncated-C lfB重组蛋白。该重组蛋白免疫新西兰大白兔可产生1∶640，000的高效价血清，该血清具有调理吞噬作用，显著促进多形核白细胞对金葡菌的吞噬能力。本项目研究结果可为进一步奶牛乳房炎疫苗研究提供基础。