马兰活性成分分离及其功能性研究

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马兰(Kalimeris indica(L.) Sch-Bip),是菊科(Compositae)马兰属(Kalimeris)宿根性多年生草本植物,具有很高的营养价值和药用价值。马兰分为多个品种,各品种叶片形状、嫩茎颜色各异,本文选取十个品种马兰为研究对象(M1-M1o),分别对其主要活性成分进行了初步研究,选取M4品种进行分离纯化,对所得活性组分抑制蛋白质非酶糖基化的活性进行了初步研究。为马兰的深加工利用提供理论依据,从而进一步促进马兰种植和加工业的发展。采用国标法测定了M1-M1o的B-胡萝卜素,采用福林-酚法测定总多酚含量,亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色法测定总黄酮含量,香草醛-浓硫酸显色法测定总皂苷含量。并初步分析了十个品种马兰抑制蛋白糖基化的活性。实验结果表明:马兰营养成分较为丰富,其中M2、M5的B-胡萝卜素含量最高;M3、M1o的多酚类物质和黄酮类物质含量最多;M4、M6的皂苷类物质含量最多。通过对十个品种马兰粗提物抑制蛋白糖基化分析得出,十个品种马兰均具有较好的抑制效果,对GO和MGO引起的蛋白质非酶糖基化反应的平均抑制率分别为52.2%和61.2%。马兰对由GO引发的蛋白质非酶糖基化反应的抑制作用与多酚含量和黄酮含量呈现一定的正相关;而马兰对由MGO引发的蛋白质非酶糖基化反应的抑制作用与皂苷含量呈现一定的正相关。综合以上各指标分析选择M4作为进一步研究的对象,采用AB-8型大孔吸附树脂和Sephadex LH-20对M4进行分离纯化,经HPLC-MS分析得马兰中含有3,5-二咖啡酰奎宁酸和3,4,5-三咖啡酰奎宁酸,并通过反复过Sephadex LH-20柱,得到一纯化合物,通过HPLC/MS和NMR分析鉴定为3,5-二咖啡酰奎宁酸。采用荧光测定法研究大孔吸附树脂纯化的各个组分:20%乙醇洗脱组分(F1)、40%乙醇洗脱组分(F2)、60%乙醇洗脱组分(F3)和80%乙醇洗脱组分(F4)以及3,5-二咖啡酰奎宁酸对蛋白质非酶糖基化抑制效果。结果表明四个组分中F2的抑制效果最佳,对GO和MGO引起的蛋白质糖基化的抑制率分别为78%和76%。F2组分分离得到的3,5-二咖啡酰奎宁酸标准品的抑制效果最高,对GO和MGO引起的蛋白质糖基化的抑制率分别为92%和95%。
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