目的:获取大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶(reMAP)基因,构建重组大肠杆菌甲硫氨酸氨基肽酶的原核高表达载体pACYCDuet-1-MAP,利用大肠杆菌BL21作为宿主菌进行原核表达,并利用表达的reMAP切除重组人干扰素-α2b(rhIFN-α2b)N末端的初始甲硫氨酸。方法:提取大肠杆菌BL21基因组作为模板,用PCR方法扩增得到大肠杆菌MAP基因,并克隆到载体质粒pGEM-7zf(-)中,将重组质粒pGEM-7zf(-)-MAP转化感受态大肠杆菌DH5α,蓝-白斑筛选及测序验证正确后,将reMAP基因克隆至表达载体质粒pACYCDuet-1,Nco I/BamH I双酶切及PCR验证正确后,将重组表达质粒pACYCDuet-1-MAP转化至感受态大肠杆菌BL21中,筛选得到阳性克隆通过IPTG诱导进行可溶性表达,经SDS-PAGE和Western blot分析及活性检测后,通过两种方法作用rhIFN-α2b:①将纯化后reMAP和rhIFN-α2b在体外适当的缓冲液中作用;②构建reMAP和rhIFN-α2b的共表达体系,实现在细胞内对rhIFN-α2b进行作用,并对两种作用方式的结果进行比较。结果:Nco I/BamH I双酶切、PCR验证及测序结果表明重组表达质粒pACYCDuet-1-MAP构建成功;SDS-PAGE和Western blot分析结果表明reMAP和rhIFN-α2b均得到正确表达;酶活性检测结果表明reMAP具有水解N端甲硫氨酸的活性,切除MET的活性>30 pmol/μg/min;两种方法作用后的rhIFN-α2b经氨基酸序列测定后显示N端起始甲硫氨酸均被切除,其中体内作用切除率>94％、体外作用切除率>96%。结论:reMAP可以用于rhIFN-α2b N末端的初始甲硫氨酸的切除。