目前，心血管疾病正日益严重地危害人类健康，而动脉粥样硬化在其发病过程中起着重要作用，业已证明人体血液中运输胆固醇的低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein，LDL)的升高及由此而引起LDL进入血管壁中并被氧化成氧化型的低密度脂蛋白是其主要原因。高密度脂蛋白(High Density Lipoprotein，HDL)在胆固醇代谢中起良性作用，能阻止动脉粥样硬化的形成及恶化。因此，国内外学者都致力于如何设法降低LDL的水平而又不引起HDL损失的研究工作。近年来，去除LDL的血液净化疗法逐渐应用于临床，其中的吸附剂吸附法由于对LDL具有选择性吸附，所以取得了较好的疗效。本论文以丝氨酰-天冬氨酰-谷氨酸(SDE)负电性三肽(此三肽广泛存在于LDL受体配体结合域7个重复序列的羧基末端，对LDL受体特异性识别LDL起着重要作用)作为配体固定到聚丙烯酰胺微球载体上制成仿生性LDL亲和吸附剂，考察其对人血浆中LDL及HDL的吸附功效。 本文用反相悬浮聚合法合成符合LDL吸附剂载体要求的聚丙烯酰胺微珠，经实验筛选出反应体系所需的最佳单体浓度(12％)、最佳分散剂用量(0.65％)、最佳油水比值(1：3)、最佳单体(AAM)与交联剂(MBA)的物质的量之比(18：1)。按此配方合成的聚丙烯酰胺微珠呈规则的球形，平均粒径为111.8μm，平均孔径为119.8nm，这些均符合LDL吸附剂载体的要求(粒径为100～200μm、平均孔径为100～200nm)。与国外同类产品相比，本实验室合成的聚丙烯酰胺微珠成 余喜讯：一种接有仿LDL受体功能结构短肽（SDE）的LDL亲和吸附剂的研究本大大降低。 本文进行了丝氨酸、天冬氨酸及谷氨酸三种氨基酸的保护。按照从梭基端到氨基端的合成路线，用风N’－二环己基碳二亚胺（DCC）／l－羟基苯骄三氮哩 （HOBt）液相合成法逐步接肽，制备得到对应的带保护基的中间体，用催化氢化还原脱去所有的保护基。最后产物利用柱层析法和薄层层析法相结合的梯度洗脱法纯化。最终产物经薄层色谱、氨基酸分析、质谱及液相色谱一质谱联用等检测手段分析，证明是纯度很高的丝氨酸一天冬氨酸一谷氨酸三肽，符合作为吸附剂配体的需要。 通过改变聚丙烯酚胺微球上的活性基团，并接上不同长度的碳氢臂制得含有不同长度手臂的载体。在此基础上，以戊二醛或l－乙基l（3－二甲基氨丙基卜碳二亚胺旧DC）为偶联剂将SDE配体连接到载体上制成吸附微珠。经红外、XPS、生化检测等分析，表明SDE配体成功地偶联到了载体上。同时对影响SDE配体固定化量的各种因素也做了初步的探讨，结果如下：戊二醛固定化SDE配体的最适条件为：SDE配体的初始浓度为sing／ml（载体用量为sg，湿重）时，效率最高；活化载体时的pH值为7刀；戊二醛的活化浓度为5％：偶联时的pH值为 7刀；偶联时间不少于 4小时。EDC固定化 SDE配体的最适条件为：偶联时的pH值应保持在4石4．8；浓度要大大超过SDE配体的浓度；反应时间不少于12小时。 通过体外静态吸附对各种吸附微珠的吸附性能进行了研究，结果发现本类吸附微珠对 LDL有亲和吸附能力。在无 Ca》的吸附体系中，各吸附微珠的吸附性能相对较低。当加入高浓度的CaZ”后，吸附微珠对LDL的吸附有明显提高，对 HDL的吸附也有增高，但不如 LDL明显。其可能的原因是：在吸附体系中如存在大量的 Cay，一方面 Ca＊可以作为桥梁连接 LDL所含磷脂极性头部的磷酸基团和吸附微珠配体上的孩基；另一方面又可交联相邻磷脂间的磷酸基团，从而促进LDL所含磷脂极性头部的胆碱N”与配体竣基的相互作用。这两者均增大了LDL吸附到吸附微珠上的机率，进而提高了吸附率。另外，从空间构象来考虑，当向吸附体系中加入CaZ”后，固定于载体表面或其孔洞内的多个相邻配体及其间隔臂分子围绕钙离子可能形成一个有利于L＊L结合的八面体结构，这样也利于本吸附剂对LDL的吸附。研究还表明，用戊二醛固定化配体制成的吸附微珠的吸附效果比用EDC偶联配体制成的吸附微珠好，这可能是因为：一 互l 四川大学博士学位论文方面，用戊二醛固定化配体制成的吸附微珠的表面含有更多能与LDL相互作用的基团（COOH），有利于 LDL的吸附；另一方面，从空间结构来看，用 EDC偶联配体制成的吸附微珠由于有带正电荷的氨基的介入，可能不利于前述八面体空间构象的形成，进而不利于LDL的吸附。