【摘 要】
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目的:本研究旨在评估长链非编码RNA生长抑制特异性转录本5（Long non-coding RNA growth arrest-specific 5,lncRNA Gas5）在小鼠单侧输尿管梗阻（Unilateral ureteric obstruction,UUO）手术诱导肾纤维化中的作用。方法:利用CRISPR/Cas9技术构建12只Gas5杂合敲除小鼠(Gas5+/-),同时选取野生型小鼠（
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目的:本研究旨在评估长链非编码RNA生长抑制特异性转录本5（Long non-coding RNA growth arrest-specific 5,lncRNA Gas5）在小鼠单侧输尿管梗阻（Unilateral ureteric obstruction,UUO）手术诱导肾纤维化中的作用。方法:利用CRISPR/Cas9技术构建12只Gas5杂合敲除小鼠(Gas5+/-),同时选取野生型小鼠（WT）12只。将Gas5+/-和WT小鼠分别进行UUO或假手术（Sham）,术后10天处死小鼠,取血浆和肾脏做后续分析。测定小鼠血浆:尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、肌酐（SCr）、超敏C反应蛋白（hs CRP）和尿蛋白与肌酐比值（UACR）的水平。使用马森染色观察胶原沉积的程度,并用免疫组织化学染色法检测:α平滑肌肉肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（Vimentin）、胶原蛋白Ⅳ（CollagenⅣ）、纤维连接蛋白（Fibronectin）在肾脏细胞外基质的分布和表达。采用q RT-PCR和免疫印迹法检测:α-SMA、波形蛋白、胶原蛋白Ⅳ、上皮细胞钙粘蛋白（E-cadherin）、转化生长因子β（TGF-β）、磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的m RNA和蛋白表达水平。结果:UUO术后,与WT组相比,Gas5+/-组小鼠的梗阻侧肾脏呈现更严重的胶原沉积和纤维化,伴血UA及SCr水平较高。此外,α-SMA、波形蛋白、胶原蛋白Ⅳ、纤维连接蛋白和MMP-9的m RNA和蛋白表达量升高,而PTEN的m RNA和蛋白表达量降低,差异有统计学意义（p<0.05）。结论:lncRNA Gas5在肾纤维化组织中表达上调,其缺失加重了UUO小鼠模型的肾纤维化。
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