目的 构建多药耐药-1基因（MDR1）和髓细胞白血病-1基因（MCL1）的RNA干扰表达质粒载体，观察单独和联合应用对耐药白血病K562-A02细胞的耐药逆转作用，探讨两个基因联合治疗对逆转耐药的协同作用。 方法 根据MDR1和MCL1基因表达序列选取有效的RNA干扰靶序列，分别使用siRNA质粒表达载体，构建两种基因特异性siRNA表达质粒，重组质粒酶切及DNA测序鉴定；然后在脂质体介导下分别和联合转染K562／A02细胞，用G418和／或Hygro B筛选出稳定表达的细胞克隆。RT-PCR分析MDR1和MCL1基因mRNA的表达；流式细胞仪测定细胞膜P-gp相对表达量；MTT法检测细胞的细胞生长曲线；激光共聚焦检测细胞的阿霉素的相对浓度；MTT法检测转染前后K562／A02细胞的阿霉素半数抑制浓度(IC₅₀)；流式细胞仪检测细胞凋亡率。 结果 1．成功构建两个基因的siRNA表达质粒，测序和酶切结果证实插入序列正确。 2．MDR1基因的siRNA质粒转染K562／A02细胞可有效封闭相应基因表达，其MDR1基因的mRNA表达相对水平是未转染细胞的56％。细胞P-gp相对表达量明显下降（P＜0.01）。激光共聚焦检测在相同阿霉素浓度孵育下细胞内药物浓度较对照组明显升高（P＜0.01）。细胞对阿霉素的药物IC₅₀是1.70±0.30mg／L，耐药逆转率是63.8％（P＜0.01）。阿霉素孵育72小时后细胞凋亡率5.33±0.40％（P＜0.01）。