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隐孢子虫能感染约79种不同的哺乳动物,可以造成宿主食欲减退,拉稀,消瘦,影响动物的生长发育。安氏隐孢子虫在奶牛中的感染率最高,对奶牛危害较大,引起奶牛不同程度的消瘦,降低饲料报酬,同时造成奶牛产奶量下降,是畜牧业潜在的危害,国外有研究表明安氏隐孢子虫也可感染人,因此对其进行检测与预防在公共卫生学上具有重要意义。本研究根据GenBank(DQ060431;AB610481)的安氏隐孢子虫COWP和HSP70基因序列设计两对特异性引物,用RT-PCR方法扩增出目的片段,构建克隆载体,双酶切后连接到pET-32a表达载体,成功构建了表达质粒pET-32a-COWP和pET-32a-HSP70。利用双酶切方法将HSP70基因连接到pET-32a-COWP,构建表达质粒pET-32a-COWP-HSP70。将三个鉴定正确的重组质粒分别转化到表达菌中,IPTG诱导表达,表达产物经过SDS-PAGE和Western blot鉴定和分析,证实获得COWP融合蛋白、HSP70融合蛋白和COWP-HSP70联合蛋白。分别将纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠三次后,ELISA检测发现,获得较高的血清效价;Western blot检测发现COWP蛋白和HSP70蛋白均可以发生反应,说明COWP融合蛋白、HSP70融合蛋白和COWP-HSP70均具有良好的免疫原性及反应原性。三个表达蛋白分别作为包被抗原,用卵囊全虫抗原免疫BALB/c小鼠制备血清,以辣根过氧化物酶标记的(HRP)羊抗鼠-IgG为二抗,建立ELISA方法。通过对比发现,以COWP-HSP70联合表达蛋白作为包被抗原建立的ELISA方法最好。以联合蛋白为包被抗原,用优化后的条件进行40份临床样品检测,30份阳性血清的OD值均大于阴阳临界值0.215,判为阳性;10份阴性血清均低于阴阳临界值0.215,判为阴性;检测结果与PCR的检测结果符合率达100%。本研究成功构建了 3个蛋白基因的表达载体,获得3个目的融合蛋白。通过不同重组蛋白包被抗原的筛选,以联合蛋白为包被抗原效果最佳,以此蛋白建立了间接ELISA方法,对临床样品进行了抗体Ig G的检测,具有一定的可行性,为隐孢子虫病的免疫诊断,疫苗防治等进一步的研究奠定了基础。