背景:同型半胱氨酸（homocystine,Hcy）作为一个新的氧化应激血管损伤因子,近年来受到越来越多的关注,研究表明,Hcy升高是心血管疾病（CVD）的独立危险因素,Hcy可以通过增加活性氧ROS产生诱导细胞的损伤,引起细胞凋亡,从而与CVD相关。IRBIT亦称为AHCYL1,是一种多功能蛋白,与激酶等靶分子是肌醇1,4,5-三磷酸受体的结合蛋白,调节离子通道、转运体、一些相关复合物与激酶等靶分子,参与细胞凋亡过程。同时大量研究揭示,CaMKIIδ可以调节心肌细胞Ca2+通道转运过程中,进而调控心肌细胞凋亡,在CVD中发挥着至关重要的作用。因此,本研究就同型半胱氨酸对心肌细胞凋亡的作用及其具体机制展开研究。目的:本研究探讨同型半胱氨酸对心肌细胞凋亡的作用及IRBIT/CaMKIIδ在其中发挥的机制。方法:1、将状态良好的大鼠心肌细胞H9c2,传代后培养24h,分为6组,分别为0mmol/LHcy、0.5mmol/LHcy、1mmol/LHcy、1.5mmol/LHcy、2mmol/LHcy、3mmol/LHcy,加不同相应浓度的Hcy处理48h。2、流式细胞学分析细胞凋亡水平收集经不同Hcy浓度处理的H9c2细胞,在流式机上检测各组H9c2细胞凋亡的比例。3、Tunel检测H9c2细胞的凋亡水平。4、用ROS试剂盒检测H9c2细胞的ROS水平。5、免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation,CO-IP）、Pull-down实验及细胞免疫荧光实验,检测IRBIT与CaMKIIδ的结合率。6、利用慢病毒转染技术分别将H9c2细胞中的IRBIT与CaMKIIδ的表达敲低。7、Western Blot实验7.1检测不同Hcy浓度下,Bcl-2、BAX、IRBIT与CaMKIIδ蛋白表达水平。7.2 sh RNA分别干扰IRBIT与CaMKIIδ表达,检测Bcl-2、BAX、IRBIT与CaMKIIδ蛋白表达水平。结果:1、分别用0mmol/L、0.5mmol/L、1mmol/L、1.5mmol/L、2mmol/L、3mmol/L不同浓度Hcy处理H9c2心肌细胞,流式结果显示,与对照组0mmol/L相比较,当Hcy浓度为2mmol/L,凋亡水平明显增加（*P<0.05）,且随Hcy浓度提升至3mmol/L,细胞凋亡率也增加（**P<0.01）;Western Blot实验结果显示,随着Hcy浓度的升高,Bcl-2的表达下降,而BAX的表达上升（*P<0.05）。2、活性氧ROS检测结果显示,与对照组0mmol/L相比,当Hcy浓度为1mmol/L,ROS水平明显增加（**P<0.01）,且随Hcy浓度的升高,细胞ROS水平明显增加（**P<0.01）,都具有统计学意义。3、用不同浓度Hcy处理H9c2细胞,检测IRBIT与CaMKIIδ是否存在差异表达,Western Blot实验结果示,随着浓度的升高,IRBIT与CaMKIIδ的表达也增加（*P<0.05）。4、检测IRBIT与CaMKIIδ是否可以在H9c2细胞中可以相互结合。在CO-IP实验中,HA-CaMKIIδ+Flag-IRBIT组中CaMKIIδ与IRBIT的表达量都明显比其他两个组的表达更高;在细胞免疫共定位实验中,CaMKIIδ-GFPII和IRBIT-Dsred在细胞中均位于胞浆,并具有明显共定位;在Pull-down实验中,对当缺失了Association结构域之后,HA-CaMKIIδ与FLAG-IRBIT蛋白的相互作用极大减弱,但是缺失了Catalytic结构域之后二者蛋白相互作用没有受到明显的影响。5、实验分为6组即Control组、Control+Hcy组、IRBIT KD组、IRBIT KD+Hcy组、CaMKIIδKD组及CaMKIIδKD+Hcy组,细胞凋亡流式实验、Tunel实验及Western Blot实验结果都显示,IRBIT KD+Hcy组、CaMKIIδKD+Hcy组都比Control+Hcy组的凋亡比例明显降低（*P<0.05）,具有统计学意义。并且IRBIT与CaMKIIδ在IRBIT KD+Hcy组、CaMKIIδKD+Hcy组两组中的表达都都比Control+Hcy组更低（*P<0.05）。结论:1、Hcy能促进H9c2心肌细胞的凋亡与ROS的产生,且都呈浓度依赖性。2、IRBIT与CaMKIIδ可以在H9c2心肌细胞中可以相互结合、相互作用。3、Hcy可以通过IRBIT/CaMKIIδ来介导H9c2心肌细胞的凋亡。