鹿角盘,即为留存于锯茸后雄性梅花鹿(或马鹿)角柄上的盘形骨化物质,在翌年春季生新茸前自发掉落,又有“鹿托盘”、“鹿花盘”、“鹿座”之称。其可用来有效治疗疮痛肿毒、瘀血疼痛、虚劳内伤、腰脊酸痛等,具备较强的抗疲劳、抗氧化、补血及降糖等活性。蛋白质、多肽在生命活动中起着相当重要的作用,而鹿角盘中蛋白质的含量高达40%以上,为鹿角盘主要的功效成分之一,其中含有天然小分子蛋白多肽和胶原蛋白等。众所周知,蛋白多肽分子量越小,越容易被人体皮肤吸收,而且护肤品行业通常通过水解胶原蛋白,获得具备更佳透皮吸收性、更低分子量的胶原肽。所以,本课题以天然小分子肽和酶解胶原肽为研究要点,探讨其护肤作用,为鹿角盘的深度开发利用提供基础理论依据。本实验利用酸提、醇沉、旋转蒸发、凝胶除盐等方法制得鹿角盘总肽除盐品,BCA法测定其蛋白含量,再通过反向高效液相色谱法制得小分子多肽,利用SDS-PAGE电泳、质谱等手段对制备的小分子多肽进行分析;另一方面,利用热水法提取鹿角盘中胶原蛋白,以胶原蛋白水解度作为指标,胰蛋白酶酶解鹿角盘中胶原蛋白,借助单因素试验、BoxBehnken设计试验来优化制备鹿角盘胶原肽的工艺,利用SDS-PAGE电泳、质谱等手段对所制备的胶原肽进行分析,确定其得率及相对分子量分布。在此基础上,将鹿角盘小分子多肽、胶原肽、胶原蛋白作用于人永生化表皮细胞(Ha Ca T)上,并研究其对Ha Ca T细胞形态和细胞增殖的影响,同时测定Ha Ca T细胞超氧化物岐化酶(SOD)活性、羟脯氨酸(Hyp)和丙二醛(MDA)含量的变化,以此来初步探究鹿角盘活性多肽的护肤作用。结果表明,本实验制得鹿角盘总肽除盐品经BCA法测定其蛋白含量为79.6%,制得的鹿角盘小分子多肽经SDS-PAGE电泳检测及质谱检测其相对分子质量大部分集中在10k Da以下;胰蛋白酶酶解制备的胶原肽经电泳及质谱检测其相对分子质量集中在5k Da以下;梅花鹿鹿角盘胶原蛋白含量为22.46%,鹿角盘胶原肽最优制备工艺是:酶解时间2.2h、p H 8.0、温度50℃、加酶量1200U/g,此条件下蛋白水解度为15.97%。比较小分子多肽、胶原肽、胶原蛋白三者对护肤作用的效果,发现三者都能在不同程度上影响Ha Ca T细胞形态、细胞增殖、细胞SOD活性、Hyp含量和MDA含量。其中,在100μg/m L浓度下,小分子多肽作用组不论是在提高SOD活力和促进Hyp产生、还是抑制MDA产生能力方面均有高于胶原肽作用组,且二者都优于胶原蛋白组。这些结果说明小分子多肽的护肤功效更好。因此确定三者的护肤效果由大到小为:小分子多肽>胶原肽>胶原蛋白。