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前言：食管癌(esophageal carcinoma, EC)是人类最常见致死性肿瘤之一,我国是世界上食管癌发病率和病死率较高的国家之一,每年因食管癌死亡者约15万人。在我国,EC的病理组织学类型主要是食管鳞状细胞癌,大部分食管癌发现时都已进入中晚期,其预后较差。浸润转移是其主要的致死性原因。P-catenin是一重要的细胞粘附分子和细胞骨架成份,同时又是Wnt信号通路中的一个重要组成部分,P-catenin在发育过程中指导机体的正常发育；在肿瘤细胞中它可以促进细胞增殖,抑制细胞凋亡。β-catenin在食管癌的浸润和转移中可能发挥重要作用。目前关于P-catenin在食管癌细胞Ecal09中的侵袭和转移中的作用及P-catenin基因在食管鳞癌中的相关差异蛋白的研究在国内外未见相关的文献报道。蛋白质组学是从整体的角度分析细胞内动态变化的蛋白质的组成与活动规律的科学。它可能为我们提供新的方法发现肿瘤相关蛋白,也必将为我们研究在食管鳞癌疾病过程中β-catenin相关蛋白研究提供帮助。目的：1.研究P-catenin基因沉默对食管鳞癌Ecal09细胞侵袭和转移特性的影响；2.对在食管鳞癌Eca109细胞P-catenin基因干扰前后差异蛋白质组学进行研究；3.研究差异蛋白和P-catenin的关系,以及它们的表达和食管鳞癌患者侵袭转移及预后的关系。方法：1.采用MTT比色法测定食管癌细胞Eca109在P-catenin基因干扰前后细胞的黏附能力,Transwell小室测定法测定转染细胞的迁移能力和侵袭能力的差异；腹腔移植法建立裸鼠食管鳞癌细胞转移模型,研究其对体内转移能力的影响。2.用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS),再结合信息学方法鉴定食管癌细胞Eca109在P-catenin基因沉默前后细胞(pGen-3-CTNNB1细胞和pGen-3-con细胞)的差异表达蛋白质,并对其中部分差异蛋白进行表达验证(QRT-PCR和Western blotting)和功能验证(瞬时转染14-3-3σ表达载体),同时研究了它们和P-catenin的关系。3.利用组织芯片(TMA)和免疫组织化学(IHC)方法分析了在细胞内已验证的3个差异蛋白(14-3-3σ, prohibitin, nm23-H1)和β-catenin在195例食管鳞癌及其正常粘膜中的表达水平及其和临床病理参数的关系,同时分析了它们在食管鳞癌组织中同P-catenin的关系。结果：1.与空白质粒转染对照组pGen-3-con及未转染组Eca109比较,干扰质粒转染组pGen-3-CTNNB1细胞在细胞外基质上的黏附能力降低；其迁移能力和侵袭能力也明显降低；未转染组、空白质粒组裸鼠腹腔内、肝脏表面和切面癌结节较多,而且癌结节较大,部分癌结节有融合。2.采用P-catenin基因沉默前后细胞株,应用2-DE分离纯化细胞的总蛋白质,MALDI-TOF-MS它们之间差异表达的蛋白质点,鉴定了13个差异蛋白质；部分差异蛋白质(14-3-3σ、prohibitin和nm23-H1)在两种细胞中的mRNA和蛋白水平差异表达得到验证。然后对14-3-3σ在Eca109细胞中的功能及其与P-catenin的关系又进行了研究,14-3-3σ上调可以抑制Ecal09细胞的侵袭转移,并且可以降低P-catenin的表达水平,和p-catenin关系密切。这说明蛋白质组学方法筛选到的差异表达蛋白质可靠。3.应用组织芯片、免疫组化和临床病理参数研究3个差异蛋白质(14-3-3σ, prohibitin, nm23-H1)和β-catenin的结果表明：14-3-3σ和nm23-H1的表达水平与ESCC的TNM分期,局部淋巴结和远处转移负相关,prohibitin和β-catenin与之正相关,并且14-3-3σ, prohibitin,和P-catenin可能是独立的ESCC预后因子。在食管鳞癌中,prohibitin和β-catenin可能有协同作用,14-3-3σ和nm23-H1与β-catenin可能有拮抗作用。结论：1.首次采用基因沉默的方法研究P-catenin在食管鳞癌细胞株Eca109侵袭转移中的作用；结果发现,干扰P-catenin的表达,可以明显降低食管鳞癌细胞株Ecal09侵袭转移能力。2.首次采用差异蛋白质组学技术研究了β-catenin siRNA转染前后的Eca109细胞株,并对部分差异蛋白质(14-3-3σ, prohibitin,nm23-H1)进行了表达验证,14-3-3σ蛋白功能验证,表明它们在β-catenin干扰以后表达水平确实发生了变化并且和P-catenin关系密切。3.采用组织芯片和免疫组化染色检测这3个差异蛋白14-3-3σ、prohibitin、nm23-H1和β-catenin在原发ESCC及正常粘膜石蜡包埋组织中的表达。结果发现,14-3-3σ, prohibitin, nm23-H1和β-catenin与ESCC浸润及淋巴结转移相关,并且它们和P-catenin的表达相关性并有统计学意义。4.采用统计学方法分析14-3-3a, prohibitin, nm23-H1和3-catenin的表达水平与ESCC(?)临床病理特征和预后的关系。结果表明：14-3-3σ,prohibitin和β-catenin是独立的ESCC预后因子。5.在食管鳞癌发展过程中, prohibitin和P-catenin可能有协同作用,14-3-3σ与nm23-H1和P-catenin可能有拮抗作用。