Aj-fglA基因在仿刺参再生过程中的表达分析

来源 :辽宁师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shengfusky
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纤维蛋白原样蛋白A属于纤维蛋白原超家族的成员,存在于脊椎动物和无脊椎的不同组织中。它在动物的先天免疫,伤口愈合,凝血反应和组织、器官再生等许多生理生化过程中起着重要的作用。我采用基因克隆(RACE)技术首次获得了仿刺参纤维蛋白原样蛋白A(Aj-fglA)的全长cDNA序列,通过生物信息学对Aj-fglA进行了分析;采用原位杂交技术(ISH)分析了纤维蛋白原样蛋白A基因在仿刺参四种不同组织中的表达部位;为了研究纤维蛋白原样蛋白A基因在仿刺参体壁、肠和呼吸树三个组织中不同再生阶段的表达量,我们采用了荧光实时定量PCR技术(Real-time-PCR)。基因克隆结果显示:纤维蛋白原样蛋白A基因cDNA全长为1524bp,开放阅读框为849bp,编码282个氨基酸残基。生物信息学分析结果显示FGLA的N末端带有一个信号肽,C末端带有一个FBG结构域,62bp的5’端非编码区,613bp的3’端非编码区。此蛋白分子量为31.96kD,理论等电点为5.64。根据此蛋白的特点,纤维蛋白原样蛋白A属于纤维蛋白原相关蛋白超家族。原位杂交结果显示,纤维蛋白原样蛋白A基因在仿刺参的体壁、肠、纵肌和呼吸树四个部位均有分布。实时荧光定量PCR实验结果显示在体壁再生的第一组中,纤维蛋白原样蛋白A基因呈现出明显的上调趋势,在10min和40min时出新峰值,接着表达量下调,在体壁再生的第二组中,随着组织的再生,纤维蛋白原样蛋白A基因表达量继续上调,在5d达到最大值,最后恢复到正常水平。在肠和呼吸树中,纤维蛋白原样蛋白A基因的表达量随着组织的再生也呈现出上升趋势,分别在20d和25d达到最大值。整理以上实验数据可以发现,在这三个组织的每一个再生阶段中纤维蛋白原样蛋白A基因的表达量均高于正常组织的水平,而只有当新组织再生完成后表达量才会逐渐恢复到正常组织的水平。由此可见,纤维蛋白原样蛋白A基因在仿刺参的再生过程中起着重要的作用。仿刺参因其较高的营养价值和经济价值而深受人民的喜爱,如何提高其生长速度、降低因仿刺参的吐脏对生长的影响以及提高苗种成活率是刺参养殖业面临的主要问题。因此,研究仿刺参的再生过程、调控通路以及与之相关的分子机制具有较为重要的理论意义和实际应用价值。
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