【摘 要】
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中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）是中国水产养殖中的重要物种之一。由中华绒螯蟹螺原体（Spiroplasma eriocheiris）引起的“颤抖病”是该蟹最具破坏性的重大疾病。目前该疾病的治疗主要还是依赖抗生素,而抗生素等化学药物的滥用可能会导致药物残留、耐药菌产生、环境污染以及水生动物免疫系统损伤等一系列问题。因此,为了保护环境和水产品的健康,迫切需要建立一种有效且无污染绿色防
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中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）是中国水产养殖中的重要物种之一。由中华绒螯蟹螺原体（Spiroplasma eriocheiris）引起的“颤抖病”是该蟹最具破坏性的重大疾病。目前该疾病的治疗主要还是依赖抗生素,而抗生素等化学药物的滥用可能会导致药物残留、耐药菌产生、环境污染以及水生动物免疫系统损伤等一系列问题。因此,为了保护环境和水产品的健康,迫切需要建立一种有效且无污染绿色防控技术。本研究目的是探讨一种应用卵黄抗体（Ig Y）的免疫方式来进行该病的防控。研究方法分三个步骤:1.IgY分离和纯化;2.特异性、敏感性测试和生长抑制测试;3.中和实验和Ig Y应用。用超声破碎的S.eriocheiris作为抗原免疫鸡。进行三次注射,每次注射之间间隔2周。四组不同的鸡分别注射PBS及200、300和400μg/m L的抗原。收获鸡蛋后,从每组鸡蛋中分离并纯化Ig Y。然后使用SDS-PAGE方法验证Ig Y,确定免疫成功。成功分离IgY后,进行间接ELISA试验以确定Ig Y的滴度,然后进行生长抑制试验以确定其使用比例。从注射了400μg/m L,Ig Y效价为1:10,000的鸡中获得了最佳的特异性Ig Y候选物。在第一次鸡免疫后第4周开始从鸡蛋中获取,并且Ig Y的使用比例为1:4。对于IgY中和实验和应用,中华绒螯蟹受到S.eriocheiri感染,并喂以Ig Y饲料。同时其他中华绒螯蟹也通过Ig Y和S.eriocheiris混合注射方式进行攻毒试验。体内实验结果显示,使用特定Ig Y并受S.eriocheiris感染的河蟹比接受正常（非特异性）Ig Y或不添加Ig Y的河蟹存活率高。体外实验结果显示,添加了特异性Ig Y的河蟹血淋巴细胞中的S.eriocheiris拷贝量与添加正常Ig Y或不添加Ig Y的蟹存活率低。同时,对各组河蟹血淋巴细胞的电子显微镜观察表明,特异Ig Y处理过的S.eriocheiris结构变化且聚集,与正常典型的螺原体螺旋结构不同,呈现不规则或破裂现象。最终,该研究为明确特异性IgY可以帮助中华绒螯蟹抵抗S.eriocheiris感染的潜在作用提供参考,并有望在水产养殖中进行运用。
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