论文部分内容阅读
目的:筛选出对药用植物病原菌防治效果较好的菌株,对其发酵液中所含活性物质的理化性质及结构信息进行研究,为开发防治药用植物病害的生物农药奠定基础。方法:采用含毒介质法比较5种生防菌对地黄、山药上几种常见病原菌的防治效果,筛选出抑菌作用最好的菌株,并对其抑菌机理进行了观察;通过有机溶剂萃取法、硫酸铵沉淀法和盐酸沉淀法,对活性物质进行粗提取,比较三种方法的提取效果;对活性粗提物进行温度、pH、蛋白酶、紫外等稳定性和茚三酮反应等理化性质研究;利用玻璃层析柱和HPLC制备的方法对活性物质进行分离纯化;通过蛋白胶条鉴定和LC-MS/MS等方法对活性物质的种类进行鉴定。结果:1.生防菌的筛选生防菌SYB10、SYB16、YCB9、FQB6、B10-26对地黄轮纹病菌(Ascochytamolleriana Wint)、山药根腐病菌(Fusarium solani Kuhn)、山药枯萎病菌(Fusariumoxysporum)、山药炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides Penz)几种病原菌都具有一定的抑制作用,但抑制效果存在较大差异。其中,对地黄轮纹病菌抑制作用最好的是YCB9和B10-26,菌落直径分别为16.0mm和17.0mm,对其它3种病原菌抑制作用最好的都是B10-26。通过对菌丝形态变化的观察,发现B10-26分泌的活性物质可使菌丝膨胀,顶端出现囊泡,从而抑制菌丝的生长。2.B10-26发酵液中活性物质的粗提取和理化性质研究有机溶剂萃取法、硫酸铵沉淀法和盐酸沉淀法均能从发酵液中提取出活性物质,其中效果最好的是盐酸沉淀法,提取率为100%。稳定性研究表明活性物质对温度、pH、蛋白酶、紫外均有较好的稳定性,同时与茚三酮反应产生紫蓝色,说明活性物质中可能存在蛋白或肽类物质。3.活性物质的分离纯化及结构鉴定通过玻璃柱层析和HPLC制备,最后得到一组由多个活性物质组成的混合物,通过蛋白质胶条鉴定和LC-MS/MS质谱鉴定,认为活性物质中主要包括脂肽类抗生素:C14BacillomycinD、 C15BacillomycinD、 C16BacillomycinD、 C17BacillomycinD,C14FengycinA、 C15FengycinA、 C16FengycinA、 C17FengycinA, C16FengycinB、C17FengycinB、C18FengycinB,C14Mycosubtilin、C15Mycosubtilin、C16Mycosubtilin,不明确具体类型的Surfactin;同时还含有多烯类抗生素Dihydrobacillaene。结论:筛选出了具有广谱抑菌作用的生防菌B10-26,其发酵液中所含活性物质理化性质稳定,通过分离纯化,发现发酵液中含有多种活性物质,主要包括有BacillomycinD、FengycinA、FengycinB、Mycosubtilin和Surfactin等脂肽类抗生素和多烯类抗生素Dihydrobacillaene。