【摘 要】
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多杀性巴氏杆菌是一种会导致牲畜、家禽出现出血性败血症或传染性肺炎的病原微生物。该菌引发的禽霍乱导致养鸭业蒙受巨大损失。随着抗菌药物的不合理应用,多杀性巴氏杆菌的多重耐药情况愈加严重。目前,关于鸭源多杀性巴氏杆菌质粒介导的耐药机制报道很少。本研究在对一株鸭源多杀性巴氏杆菌临床分离强毒株RCAD0259进行全基因组序列和质粒测序的基础上进行序列分析,结果显示该菌株为ST129型,共含有7个耐药基因,其
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多杀性巴氏杆菌是一种会导致牲畜、家禽出现出血性败血症或传染性肺炎的病原微生物。该菌引发的禽霍乱导致养鸭业蒙受巨大损失。随着抗菌药物的不合理应用,多杀性巴氏杆菌的多重耐药情况愈加严重。目前,关于鸭源多杀性巴氏杆菌质粒介导的耐药机制报道很少。本研究在对一株鸭源多杀性巴氏杆菌临床分离强毒株RCAD0259进行全基因组序列和质粒测序的基础上进行序列分析,结果显示该菌株为ST129型,共含有7个耐药基因,其中有5个位于质粒上。其中携带4个耐药基因的质粒p RCADGH-2还含有一个完整的IV型分泌系统,这是首次在多杀性巴氏杆菌质粒上发现IV型分泌系统。为了验证质粒介导的耐药机制,试验首先选择消除率较高的SDS-高温传代培养法和电穿孔法对多杀性巴氏杆菌RCAD0259进行质粒消除。经过对SDS对RCAD0259 MIC值的测定,选用了42℃、0.3%SDS的条件进行质粒消除,最高传代培养到100代仍未能成功筛选出质粒消除株。多杀性巴氏杆菌电转条件,选用2.0kV到4.0kV18个梯度的电压条件,分别脉冲1到3次,也未能得到质粒消除株。为了验证质粒是否具有水平转移能力,选用大肠杆菌J53Azr（叠氮钠耐药菌株Lac-菌株）为受体菌进行接合转移试验,得到接合子大肠杆菌J53-0259且质粒存在稳定,测定多杀性巴氏杆菌RCAD0259中质粒到大肠杆菌J53Azr的接合转移频率为2×10-6到7×10-6的范围内。PCR扩增结果证实,质粒p RCADGH-2所携带的四种耐药基因均随质粒水平转移到接合子大肠杆菌J53-0259中,其中耐药基因arr-2、bla VEB-18均能成功介导菌株对利福平、青霉素类以及头孢菌素类抗生素耐药。利用表达型质粒p ET32a成功构建出表达阳性菌株大肠杆菌J53-cmlA、大肠杆菌J53-aadB。经过MIC测定以及RT-PCR验证,结果证实aad B基因能够介导菌株对氨基糖苷类药物耐药,而cmlA基因不能介导菌株对氯霉素的耐药。对分离鉴定的多杀性巴氏杆菌进行MIC测定并对多杀性巴氏杆菌RCAD0259携带的7种耐药基因进行分子流行病学调查,结果显示耐药基因aadB、arr-2、sul2、dfrA在多杀性巴氏杆菌中检出率较高（≥65%）,75%（12/16）的多杀性巴氏杆菌中arr-2基因不能介导菌株对利福平耐药。
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