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猪链球菌(Streptococcus suis，SS)是一种重要的人畜共患病病原，根据菌体英膜多糖抗原性的不同，分为35个血清型(1-34型，1／2型)。世界范围内以SS2流行最广，致病性最强。国内1991年在广东省首次分离鉴定到SS2，随后于1998年和2005年分别在江苏和四川部分地区暴发人感染SS2并致人死亡，危害严重。 欧美等国家对猪链球菌毒力因子的研究发现菌株有多种基因型，致病性最强的基因型为cps2／epf+／mrp+／sly+。而国内SS2分离株的毒力因子分布情况不很清楚，本实验对国内SS2分离株的毒力因子进行检测。并与国外菌株的毒力因子分布情况进行比较，为建立检测致病性SS2的多重PCR方法提供依据。选取猪链球菌7种主要毒力因子—谷氨酸脱氢酶(gdh)、荚膜多糖(cps)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、胞外因子(epf)、溶血素(sly)、纤连蛋白／血纤蛋白原结合蛋白(fpbs)和毒力相关基因orf2，设计与合成7对引物，用PCR方法进行检测。结果显示：25株SS2国内分离株，96％(24／25)表现为cps2／gdh+／epf+／mrp+／sly+／fbps+／orf2+，仅1株表现为cps2／gdh+／epf-／mrp+／sly+／fbps+／orf2+。1株SS7国内分离株为cps7／gdh+／epf-／mrp-／sly+／fbps-／orf2+；2株SS9国内分离株均为cps9／gdh+／epf-／mrp-／sly-／fbps-／orf2+，可见国内SS2分离株的基因型比较相似，毒力基因分布特征有特点，提示我国目前SS2的主要流行菌株是同时具有7种毒力因子的高致病菌株。 结合上述毒力因子分布情况，根据SS2的cps2J、mrp、orf2基因(virulent-associate sequence orf2)设计合成三对引物，建立三重PCR检测方法，并对PCR扩增产物进行测序、酶切、特异性及敏感性实验。结果显示：26株SS2致病菌株(25株国内病猪分离株，1株德国标准参考株)均同时扩增出这三个目的片段，5株其它血清型猪链球菌(SS1，SS7，SS9)及13株非猪链球菌的其它猪源链球菌(兰氏B群，C群和D群)均未扩增出cps2J和mrp片段，检测结果与菌株的已知毒力因子背景完全相符。26株SS2的PCR扩增片段经酶切鉴定，与预期结果一致。以SS2四川株ZY05719为模板的三重PCR产物(cps2，mrp，orf2)测序结果与GenBank上相关序列比较，同源性分别为99％、100％、94％，测序结果登录GenBank，登录号分别是cps2J(DQ207606)、mrp(DQ207605)、orf2(DQ207938)。该PCR敏感极限是600CFU。本试验所建立的三重PCR特异性强、敏感性好，可用于实验室猪链球菌2型的快速鉴定，有利于猪链球菌