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目的研究各WHO分级的脑胶质瘤组织中SNORD47的表达水平,WHO分级IV级胶质瘤组织中SNORD47与HOTAIR的表达相关性,以及SNORD47对胶质瘤患者生存、预后的影响。进一步研究SNORD47对脑胶质瘤增殖、周期、侵袭等生物学行为的影响,从而为抑制胶质瘤增殖、降低胶质瘤侵袭提供新的思路。方法1.第一步运用qRT-PCR检测124例脑胶质瘤组织及其临近的正常脑组织的SNORD47的表达水平,初步探究SNORD47在胶质瘤中的表达水平。2.第二步运用q RT-PCR检测124例不同WHO分级脑胶质瘤标本中SNORD47、GAS5、HO TAIR的表达水平,并分析WHO分级IV级中SNORD47与HOTAIR的表达相关性、SNORD47与胶质瘤患者临床病理特征之间的关系以及SNORD47对胶质瘤患者生存、预后的影响。3.第三步通过在U87-MG、U251细胞中转染lenti-SNORD47,检测其对胶质瘤细胞生物学行为的影响a.采用lenti-SNORD47转染U87-MG及U251胶质瘤细胞,采用qRT-PCR检测SNORD47及GAS5的表达;b.CCK-8、平板克隆、Edu细胞增殖实验检测过表达SNORD47后细胞增殖能力的变化;c.流式细胞术、细胞免疫荧光实验检测转染lenti-SNORD47后对细胞周期的影响,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达水平;d.Transwell实验检测过表达SNORD47后细胞侵袭能力的变化,划痕实验检测过表达SNORD47后细胞迁移能力的变化,细胞免疫荧光实验检测转染lenti-SNORD47后细胞骨架及EMT的改变,Western blot检测转染lenti-SNORD47后EMT相关蛋白的改变。4.第四步研究在U87-MG、U251细胞中转染lenti-SNORD47后对细胞耐药性的影响a.用逐渐升高浓度的替莫唑胺(TMZ)处理U87-MG、U251胶质瘤细胞72h,筛选出最适浓度的替莫唑胺;b.CCK-8、流式细胞术分别检测lenti-NC、lenti-SNORD47、lenti-NC+TMZ、lenti-SNORD47+TMZ各组细胞增殖能力及细胞周期的改变。5.第五步利用体内原位裸鼠模型研究SNORD47及替莫唑胺对裸鼠颅内肿瘤的影响,以及二者间的协同作用。结果1、脑胶质瘤组织中SNORD47的表达水平及其对胶质瘤患者生存、预后的影响a.SNORD47在肿瘤组织中的表达明显低于相邻的正常脑组织(P<0.01);b.WHO IV级脑胶质瘤组织中SNORD47的表达明显低于WHO II级及III级脑胶质瘤组织(P<0.05);GAS5的表达在各分级肿瘤中没有明显的统计学差异;HOTAIR的表达随着肿瘤级别的增高而升高,差异具有统计学意义;在WHO IV级脑胶质瘤组织中SNORD47与HOTAIR表达呈负相关(R=-0.5819,P<0.01);c.临床病理特征分析结果提示SNORD47的低表达与WHO III/IV级相关。d.患者生存分析结果提示SNORD47高表达患者生存期明显长于SNORD47低表达患者,差异显著(P=0.0262)。2、用慢病毒转染过表达SNORD47后发现U87-MG、U251细胞SNORD47表达水平明显增高;CCK-8、平板克隆、Edu增殖等实验结果提示SNORD47能显著抑制胶质瘤细胞的增殖能力。3、转染lenti-SNORD47后发现胶质瘤细胞G2期比例明显升高;细胞免疫荧光结果提示过表达SNORD47后p H3阳性细胞数明显降低;cell cycle相关蛋白表达明显改变。4、转染lenti-SNORD47后,细胞侵袭、迁移能力显著下降;细胞免疫荧光及Western blot结果提示EMT明显受到抑制。5、用替莫唑胺处理慢病毒稳转的细胞发现,相较对照组和单一替莫唑胺处理或单一lenti-SNORD47处理,lenti-SNORD47和替莫唑胺联合处理对于细胞增殖的抑制效果及细胞周期的阻滞效果更明显。6、体内原位裸鼠成瘤实验发现,SNORD47能够显著抑制肿瘤的生长,增强肿瘤对替莫唑胺的敏感性,并且显著延长裸鼠的生存时间。结论1、SNORD47在脑胶质瘤组织,特别是WHO IV级脑胶质瘤组织中低表达,并且与HOTAIR表达呈负相关,并能显著延长患者生存时间;2、SNORD47能显著抑制U87-MG、U251细胞增殖、侵袭能力;3、SNORD47能增强替莫唑胺的疗效;4、SNORD47可能作为胶质瘤治疗的潜在靶点。