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目的: 研究抑制长链酰基辅酶A合成酶活性对COX-2调控HSC-T6增殖的影响。 方法: 1.体外培养HSCs-T6细胞,将构建好的pYr-1.1COXshRNA转染至活化的HSCs-T6细胞中,在荧光显微镜下观察其转染效率。分组为a)空载体组( NC组):活化的HSCs-T6细胞+pYr-1.1-HK;b)COX-2shRNA组( KD组):活化的HSCs-T6细胞+pYr-1.1-COX2shRNA;c)NC+Acsl抑制剂组:活化的HSCs-T6细胞+pYr-1.1-HK+Acsl抑制剂Triacsin C;d)KD+Acsl抑制剂组:活化的HSCs-T6细胞+pYr-1.1-COX-2shRNA+Acsl抑制剂Triacsin C。 2.利用MTT法检测沉默COX-2对HSCs-T6的增殖情况。 3.利用RT-PCR技术检测转染48h后各组HSCs-T6细胞内a-SMA、COX-2、Acsl1、Acsl3、Acsl4、Acsl5、Acsl6基因表达情况。 结果: 1.转染的HSCs-T6细胞内可见绿色荧光质粒,且转染率大于75%,说明质粒转染成功; 2.与空载体组相比较,转染COX-2shRNA质粒,48h后HSCs-T6细胞增殖率降低,且有统计学意义(P<0.05);72h后的增殖率降低更明显,且有统计学意义(P<0.05); 3.a-SMA、COX-2、Acsl家族的Q-PCR法检测结果:与空载体组相比,COX-2shRNA组a-SMA、COX-2表达降低,Acsl6 mRNA表达明显增强,Acsl其它亚型表达无统计学意义;与COX-2shRNA组相比, COX-2shRNA+Acsl抑制剂组a-SMA、COX-2表达增强,Acsl6 mRNA表达降低。 4.MTT检测各组细胞活力结果:NC+Acsl抑制剂组与NC组、KD组相比较,促进HSCs-T6细胞的增殖;KD+Acsl抑制剂组与KD组比较,促进HSCs-T6细胞的增殖;KD+Acsl抑制剂组与NC+Acsl抑制剂组比较,HSCs-T6细胞的增殖抑制。 结论: 1.沉默COX-2可有效抑制HSC-T6增殖。 2.抑制Acsl活性能逆转沉默COX-2对HSC-T6增殖的抑制作用,提示COX-2可能通过Acsl通路调控HSC-T6增殖。