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第一部分β-TrCP在AML患者中的表达研究背景:急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia,AML)是源自造血干细胞的血液系统中的恶性克隆性疾病,除急性早幼粒细胞白血病患者可以长期存活外,大多数类型AML患者存活期短,预后欠佳。AML的具体发病机制至今尚未明确,因此在分子水平上继续探索AML的发病机制有着十分重要的意义。泛素-蛋白酶体通路通过特异性地介导底物的泛素化,介导细胞的多种生理活动,在肿瘤的发生、发展、耐药中都起着重要作用。在此途径中,泛素活化酶E1、泛素结合酶E2和泛素连接酶E3共同催化泛素分子共价连接到底物的赖氨酸残基上,进一步形成泛素链,被泛素化的蛋白底物随后被蛋白酶体特异性识别并降解。其中E3泛素连接酶常以蛋白复合体的形式募集E2泛素结合酶、调控泛素化过程,在整个泛素化过程中起着关键的作用,并参与细胞增殖、周期、凋亡等多个生物学过程。F-box蛋白是泛素连接酶E3的重要组成部分,F-box蛋白的C末端则负责特异性地识别并捕获底物,介导底物的泛素化和降解。β-TrCP则是一种十分重要的F-box蛋白,它是一种由Slimb基因编码的、由569个氨基酸组成的60kDa的调节组件蛋白,它能够特异性地识别底物并对底物进行泛素化降解,从而调节细胞的生理活动,对肿瘤的发生、发展产生重要的影响。大量研究表明,β-TrCP通过介导底物泛素化可以激活Wnt信号通路及NF-κB信号通路,Wnt信号通路及NF-κB信号通路在多发性骨髓瘤、淋巴瘤及AML等血液系统肿瘤的发生、发展及耐药中起着重要的作用,除此以外,β-TrCP可以促进组蛋白H3K27三甲基化,从而促进滤泡型淋巴瘤及弥漫大B细胞淋巴瘤的发生和发展,但β-TrCP在AML患者中的表达及其在体内的作用机制仍不明确,本研究通过检测AML患者骨髓细胞中β-TrCP的表达,探讨其在AML发生发展中的可能作用,为将来的白血病诊断治疗提供可靠的理论和实践依据。研究目的:本研究应用实时荧光定量PCR技术,检测β-TrCP基因在AML患者骨髓细胞中的表达情况,分析β-TrCP在AML患者中的表达,并探讨与预后的关系。研究方法:研究纳入山东大学齐鲁医院2015年2月2日至2018年9月25日初诊的AML患者100例,其中非M3 AML患者79例,M3患者21例,复发AML患者10例,CR患者6例以及健康对照24例。对患者的骨髓标本采用Ficoll密度梯度离心法分离骨髓中的单个核细胞,采用RT-PCR法检测AML患者骨髓标本中的β-TrCP相对含量,分析β-TrCP表达与AML患者临床预后之间的关系。研究结果:1.β-TrCP在AML各组相对表达水平呈偏态分布,初诊AML组和复发AML组β-TrCP表达均高于健康对照组(P<0.05),但在预后较好的M3患者中β-TrCP表达与对照组相比未发现明显差异(P>0.05)。2.通过检测6例的初诊非M3 AML患者与其第一次缓解后骨髓中β-TrCP的表达水平发现,缓解后较初诊时β-TrCP的表达水平明显下调(P<0.05)。3.将79例非M3 AML患者根据β-TrCP表达水平表达分为高表达组和低表达组,探讨β-TrCP表达水平与临床特征的关系,发现高表达β-TrCP患者初诊时外周血白细胞更高,预后核型更差(P<0.05),高表达β-TrCP患者生存期和无复发生存期也更短(P<0.05)。4.Kaplan-Meier法单因素分析发现患者发病年龄、白细胞、血小板、是否存在NPM1突变、预后核型、骨髓中原始细胞数、β-TrCP表达水平可能是影响患者预后的因素,为了进一步探索影响AML患者预后的独立因素,COX回归分析发现患者发病年龄、发病时外周血白细胞数、血小板、是否存在NPM1突变、β-TrCP表达水平是影响患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:1.初诊AML患者和复发AML患者骨髓单个核细胞中β-TrCP的表达水平较对照组明显升高,但在预后较好的M3患者中β-TrCP表达与对照组相比未发现统计学差异。2.AML患者缓解后较初诊时β-TrCP的表达水平明显下调。3.发现高表达β-TrCP患者初诊时外周血白细胞更高,预后核型更差,高表达β-TrCP患者总存期和无复发生存期也更短,COX多因素分析患者发病年外周血白细胞数、血小板、是否存在NPM1突变、β-TrCP表达情况是影响患者预后的独立危险因素。第二部分F-box蛋白在血液肿瘤中的作用泛素蛋白酶体系统(Ubiquitin Proteasome System,UPS)是一个十分精确的蛋白质降解系统,它通过一系列蛋白质泛素化的过程来介导蛋白质翻译后修饰。F-box蛋白是参与蛋白质泛素化过程的一个十分重要角色,它调节着细胞的多种生理活动,包括细胞周期、转录、细胞信号传递、细胞凋亡、DNA修复和DNA复制等生理过程。近年来,大量的F-box蛋白家族成员已经被证实是参与恶性肿瘤发生、发展重要组成部分。在这篇综述中,我们将详细讨论F-box蛋白在血液系统恶性肿瘤的发生、发展、耐药中的作用。