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【目的】探讨低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL)或油酸(Oleic acid,OA)荷脂下二甲双胍对肝细胞脂质蓄积的影响及作用机制。【方法】(1)体外培养Huh7细胞,细胞增殖及毒性检测试剂盒检测细胞存活率,以筛选合适的二甲双胍处理浓度。(2)使用50 mg/L LDL使Huh7细胞荷脂,随后使用不同浓度二甲双胍(0 m M、5 m M、10m M、15m M)处理24小时,油红O染色、BODIPY脂质探针观察细胞内脂质含量。(3)二甲双胍预处理Huh7细胞24小时,再用20μg/ml Dil-LDL孵育4小时,荧光显微镜检测细胞对Dil-LDL摄取能力。(4)分别用不同浓度二甲双胍(0m M、5 m M、10 m M、15m M)单独处理Huh7细胞,或使用50 mg/L LDL荷脂情况下,15m M二甲双胍同时处理Huh7细胞,Western blot分别检测LDLR、SREBP-2和PCSK9的表达。(5)使用0.6m M OA使Huh7细胞荷脂,随后加入不同浓度二甲双胍(5 m M、10 m M、15m M)处理24小时,采用BODIPY脂质探针观察细胞内脂质含量。(6)分别用不同浓度二甲双胍(0 m M、5 m M、10 m M、15m M)单独处理Huh7细胞,或使用0.6m M OA荷脂情况下,15m M二甲双胍同时处理Huh7细胞,Western blot分别检测SREBP-1c和TM6SF2的表达。【结果】(1)0mM-15mM浓度范围内二甲双胍对Huh7细胞存活无明显影响。(2)油红O染色结果显示,与空白对照组相比,LDL处理组Huh7细胞内脂质蓄积明显增加,二甲双胍呈浓度依赖性降低LDL荷脂诱导的细胞内脂质蓄积;BODIPY荧光脂质探针结果显示,LDL处理组Huh7细胞内绿色荧光标记脂滴增多,二甲双胍呈浓度依赖性降低LDL荷脂诱导的绿色荧光强度增加。(3)二甲双胍呈浓度依赖性抑制Huh7细胞对Dil-LDL的摄取。(4)Western blot结果显示,二甲双胍呈浓度依赖性下调Huh7细胞中LDLR、SREBP-2和PCSK9基础水平表达,Huh7细胞加入LDL处理的情况下15m M二甲双胍仍能下调LDLR、SREBP-2和PCSK9的蛋白表达。(5)BODIPY荧光脂质探针结果显示,OA处理组Huh7细胞内绿色荧光标记脂滴增多,二甲双胍呈浓度依赖性降低OA荷脂诱导的绿色荧光强度增加。(6)Western blot结果显示,二甲双胍呈浓度依赖性抑制Huh7细胞中SREBP-1c的蛋白表达,增加TM6SF2的蛋白表达;而且15 m M二甲双胍可以明显抑制OA诱导的Huh7细胞中SREBP-1c表达上调,逆转OA诱导的Huh7细胞中TM6SF2表达下调。【结论】1.二甲双胍可抑制LDL诱导的肝细胞脂质蓄积,其作用机制与二甲双胍下调SREBP-2/LDLR信号途径,减少细胞胆固醇摄取有关。2.二甲双胍可抑制OA诱导的肝细胞脂质蓄积,其作用机制与二甲双胍下调TG合成促进因子SREBP-1c表达,以及上调肝细胞TRLs分泌促进因子TM6SF2表达有关。