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糖苷水解酶第32家族包括内切菊粉酶、外切菊粉酶、蔗糖酶及内切β-2,6-果聚糖酶等，主要催化水解含β-2,6果糖苷键、β-2,1果糖苷键或β-D果糖苷键的化合物，在理论研究方面具有一定的意义，在饲料、食品、生物燃料、洗涤、制糖和医药等领域具有潜在的应用前景。目前，尚未有Sphingobacterium sp.来源的内切β-2,6-果聚糖酶的报导，也未有具有耐盐耐乙醇耐蛋白酶和表面活性剂的菊粉酶报导，而微生物来源的低温蔗糖酶也报导甚少。本论文将分别来源于Sphingobacterium sp.、 Sphingomonas sp.和Bacillussp.的3个酶编码基因levAGN25、 inuAJB13和sucAHJ14重组到pEASY-E1或pEASY-E2载体上，并将重组质粒转化到Escherichia coli BL21（DE3）中进行表达。利用组氨酸标签纯化重组酶LevAGN25、InuAJB13和SucAHJ14，并对其进行了酶学性质的研究和定点突变。研究表明：（1）重组酶LevAGN25的最适pH为6.0，在pH5.0-10.0范围内具有较好的稳定性；最适温度为55℃，在10℃和20℃分别具有13.5%和32.6%的酶活，50℃时的热稳定性良好；专一内切β-2,6-果聚糖（levan）生成果寡糖。LevAGN25是一种Sphingobacterium sp.来源的新型专一内切β-2,6-果聚糖酶，该酶在底物专一性研究上具有理论意义，在食品、医疗、低温相关行业具有潜在的应用前景。（2）重组酶InuAJB13的最适pH为5.5，在pH4.0-7.0具有较好的稳定性；最适温度为55℃；具有非常好的耐盐性和一定的乙醇耐受性；胰蛋白酶、蛋白酶K、表面活性剂、大部分金属离子及市售洗衣液对其活性无影响或影响微弱。该重组酶在耐盐机制研究方面具有一定的理论价值，在饲料、洗涤以及高盐食品和海产品加工过程中具有潜在的应用前景。（3）重组酶SucAHJ14的最适pH为8.0，在pH7.0-9.0下具有较好的稳定性；具有典型低温酶的特征，即最适温度为35℃，在10℃和20℃分别具有26.6%和64.0%的酶活，热稳定性低于30℃；Hg2+能完全抑制酶的活性，而Mn2+和β-Mercaptoethanol对酶有激活作用；专一水解蔗糖。作为一种典型的低温酶，SucAHJ14具有一定的理论研究价值，为蔗糖酶低温活性机理的研究提供了良好材料。（4）经过序列比较和同源建模分析，利用定点突变方法证明DP、RDP和ECP上的D34、D151和E214是内切β-2,6-果聚糖酶LevAGN25活性中心的必要氨基酸，其中，D34和E214可能是催化残基，D151可能与底物结合位点的识别有关。WMNDPNG上的D40是外切菊粉酶InuAJB13活性中心的必需氨基酸，D40E影响重组InuAJB13的最适温度但不能改变InuAJB13的外切性质。本研究获得了3个GH32家族糖苷水解酶，分别为Sphingobacterium sp.来源的专一内切β-2,6-果聚糖酶，Sphingomonas sp.来源的耐盐耐乙醇耐蛋白酶和表面活性剂的外切菊粉酶，Bacillus sp.来源的低温碱性蔗糖酶。它们不仅为这类糖苷水解酶的结构和功能研究提供了良好的材料，还具有潜在的应用前景。