论文部分内容阅读
越来越多的证据表明微丝骨架在稻瘟菌的生长发育和致病中发挥了重要作用。微丝骨架采用不同排布形式和动态变化以应对稻瘟菌不同类型细胞的活动需求。然而,在稻瘟菌发育及致病过程中,微丝骨架形成和组装的分子机制,目前还知之甚少。
在本研究中,对稻瘟菌微丝骨架相关蛋白Twinfilin(MoTwf)进行了功能分析。发现在稻瘟菌中敲除MoTwf基因严重影响了稻瘟菌的致病能力。MoTwf主要定位在菌丝头部囊泡组织中心延伸出的丝状微丝上,并且体外生化实验表明MoTwf能够直接结合微丝骨架,促使微丝成束。其N端ADF(Actin Depolymerizing Factor)结构域具有微丝的结合活性,C端ADF具有微丝的结合和成束活性。进一步研究发现,Motwf缺失突变体中丝状微丝的数量、宽度和密度都显著减少,同时伴随着Motwf突变体的内吞能力及外泌能力都出现缺陷。另外,通过免疫沉淀-质谱(IP-MS)分析,发现MoTwf能够通过相互作用,同伏鲁宁体(Woronin body)的主要组成部分MoHex1以及微丝马达蛋白MoMyosin-2形成复合体。在野生型稻瘟菌中,MoHex1以及MoMyosin-2主要在菌丝顶端附近聚集,而MoTwf缺失后,这两个蛋白在菌丝顶端的分布明显减少,从而导致Motwf突变体菌丝顶端难以维持高浓度活性氧水平。
总之,发现MoTwf一方面通过直接与微丝骨架结合,通过促使微丝成束的方式组织微丝;另一方面,通过与MoHex1以及MoMyosin-2形成复合体,介导伏鲁宁体在菌丝顶端的分布,从而精细调节菌丝头部微环境的活性氧水平,而参与微丝骨架的组装调节。MoTwf对稻瘟菌微丝骨架组装的双重调节,为理解稻瘟菌发育及致病过程中的细胞生物学机制增添了新的实验依据,为利用分子生物学抗病育种提供了新的候选基因。
在本研究中,对稻瘟菌微丝骨架相关蛋白Twinfilin(MoTwf)进行了功能分析。发现在稻瘟菌中敲除MoTwf基因严重影响了稻瘟菌的致病能力。MoTwf主要定位在菌丝头部囊泡组织中心延伸出的丝状微丝上,并且体外生化实验表明MoTwf能够直接结合微丝骨架,促使微丝成束。其N端ADF(Actin Depolymerizing Factor)结构域具有微丝的结合活性,C端ADF具有微丝的结合和成束活性。进一步研究发现,Motwf缺失突变体中丝状微丝的数量、宽度和密度都显著减少,同时伴随着Motwf突变体的内吞能力及外泌能力都出现缺陷。另外,通过免疫沉淀-质谱(IP-MS)分析,发现MoTwf能够通过相互作用,同伏鲁宁体(Woronin body)的主要组成部分MoHex1以及微丝马达蛋白MoMyosin-2形成复合体。在野生型稻瘟菌中,MoHex1以及MoMyosin-2主要在菌丝顶端附近聚集,而MoTwf缺失后,这两个蛋白在菌丝顶端的分布明显减少,从而导致Motwf突变体菌丝顶端难以维持高浓度活性氧水平。
总之,发现MoTwf一方面通过直接与微丝骨架结合,通过促使微丝成束的方式组织微丝;另一方面,通过与MoHex1以及MoMyosin-2形成复合体,介导伏鲁宁体在菌丝顶端的分布,从而精细调节菌丝头部微环境的活性氧水平,而参与微丝骨架的组装调节。MoTwf对稻瘟菌微丝骨架组装的双重调节,为理解稻瘟菌发育及致病过程中的细胞生物学机制增添了新的实验依据,为利用分子生物学抗病育种提供了新的候选基因。