阿司匹林浸润360°连续直角边缘人工晶状体对晶状体上皮细胞迁移的抑制作用研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:maamyaayha
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目的:后发性白内障是白内障手术后常见的并发症之一,晶状体上皮细胞发生异常增殖、迁移、上皮间质转化是后发性白内障形成的共同细胞学基础。目前后发性白内障主要依赖于激光和二次手术进行治疗。但由于近年来患者对术后视觉质量的要求增高,激光或手术治疗带来的人工晶状体损伤或移位等并发症逐渐得到重视,应用人工晶状体及药物干预后发性白内障的发生是减少后发性白内障的重要方法。阿司匹林是年龄相关性疾病的常用药物,有研究表明,阿司匹林能有效抑制晶状体上皮细胞上皮间质转化的过程,而其对晶状体上皮细胞增殖、迁移的作用目前相关研究较少。人工晶状体载药是白内障术后抑制后发性白内障发生方法之一,目前仍处于实验研究阶段。已有的研究表明,360°连续直角边缘人工晶状体能更有效地抑制晶状体上皮细胞在后囊膜的迁移,但临床的长期证据显示,不同类型360°连续直角边缘的人工晶状体,其后发性白内障发生率存在差异。本研究拟进行阿司匹林人工晶状体载药的体外释放实验,探究阿司匹林浸润不同类型360°连续直角边缘人工晶状体对晶状体上皮细胞迁移抑制作用。方法:取对数生长期的人晶状体上皮细胞系(SRA01/04、HLE-B3),使用0m M,1.25m M,2.5m M,5m M,10m M,20m M浓度的阿司匹林细胞培养液处理细胞,应用细胞活力检测试剂盒CCK8实验检测SRA01/04、HLE-B3细胞系中阿司匹林的半数细胞抑制浓度。应用Hoechst活细胞染色及Transwell法分别检测阿司匹林处理后晶状体上皮细胞的增殖及迁移。使用Transwell小室、细胞爬片、Ⅳ型胶原、人工晶状体、TGF-β2建立后发性白内障体外囊袋模型,并设置一个空白处理的Transwell小室作为模型对照组;人晶状体上皮细胞系SRA01/04、HLE-B3培养于体外囊袋模型及空白Transwell小室中,应用倒置显微镜观察体外囊袋模型中后发性白内障早期病理表现;苏木精-伊红染色观察体外囊袋模型中细胞形态改变。将不同类型360°连续直角边缘人工晶状体分为平台板式袢Hydro Smart组、C型袢Hydro Smart组、C型补偿袢Hydrophobic组,并设置一各处理相同但不植入人工晶状体的空白对照组,应用通透处理后的人工晶状体浸润阿司匹林为人工晶状体载药组,并设置同样浓度的DMSO浸润人工晶状体作为对照组。应用紫外光学分光光度计检测阿司匹林释放浓度。人晶状体上皮细胞系SRA01/04培养于各组植入人工晶状体的体外囊袋模型;应用细胞排斥区分析法检测各组人工晶状体后囊膜区细胞迁移抑制率。所有实验数据使用Graphpadprim8.0进行统计分析,各组间比较采用LSD-t检验,p<0.05认为差异具有统计学意义。结果:CCK8细胞活力检测阿司匹林分别处理SRA01/04、HLE-B3细胞系24小时后的IC50值分别是(7.31±0.94)m M、(11.10±0.89)m M;处理48小时后的IC50值分别是(7.79±0.89)m M、(8.54±0.86)m M。阿司匹林处理48h后晶状体上皮细胞SRA01/04、HLE-B3的增殖率分别是(71.67±4.64)%、(48.79±9.87)%;迁移率分别是(62.89±6.74)%、(64.97±1.26)%。48h后体外囊袋模型后囊膜区见到晶状体上皮细胞SRA01/04形成类似早期Sommering环和小型Elschning珍珠样小体等后发性白内障表现;苏木精-伊红染色后人工晶状体组可见迁移的SRA01/04细胞呈纤维状。模型对照组未见类似细胞分布及形态改变。HLE-B3细胞体外囊袋模型组细胞形态变化较对照组无明显差异。37°C阿司匹林浸润通透性处理后的Hydrosmart人工晶状体14天,可以检测到7天内持续的药物释放,37°C阿司匹林浸润通透性处理后的Hydrophobic人工晶状体,仅可以检测到3天内药物释放。与空白对照组相比,平台板式袢Hydro Smart组、C型袢Hydro Smart组、C型补偿袢Hydrophobic组人工晶状体后囊膜区计数区域单位面积细胞迁移率结果分别为(19.42±2.10)%、(27.12±4.35)%、(32.96±4.60)%。与空白对照组相比,各组阿司匹林浸润人工晶状体组细胞迁移率分别为(8.91±2.46)%、(13.54±1.47)%、(13.36±2.10)%。结论:阿司匹林组在体外降低SRA01/04、HLE-B3细胞系晶状体上皮细胞的增殖率,提高SRA01/04、HLE-B3细胞系晶状体上皮细胞的迁移抑制率。阿司匹林浸润Hydrosmart人工晶状体相对于阿司匹林浸润Hydrophobic人工晶状体增加晶状体上皮细胞迁移抑制率。相比于其他类型360°连续直角边缘人工晶状体,阿司匹林浸润360°连续直角边缘平台板式袢Hydrosmart人工晶状体细胞迁移抑制率更高。关于360°连续直角边缘人工晶状体载药阿司匹林的研究结果将为非手术治疗后发性白内障提供新的可行性方法。
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