[目的]人单纯疱疹病毒I型(human herpes simplex virus type I,HSV-1)是一种包膜DNA病毒,可以引起口唇疱疹等疾病,并潜伏在三叉神经节形成潜伏感染。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类非编码调控性单链小分子RNA,能够通过与靶mRNA特异性的碱基配对结合对靶基因进行转录后水平调控。多项研究表明,miRNA不仅参与正常细胞功能的调控,在病毒与宿主之间以及病毒复制等方面也发挥着重要的作用。我们的前期工作表明,HSV-1感染HeLa细胞后,miR-101明显升高,并通过抑制ATP5B的表达调控病毒的复制。但这种miRNA对病毒复制的影响机制尚不明确,本文主要从HSV-1诱导的相关miRNA在宿主-病毒间的影响展开研究。【方法】①通过HSV-1感染HeLa细胞,利用real-time PCR检测miR-101及其前体的RNA水平,然后利用生物信息学方法预测miR-101的启动子。②根据预测启动子的位置在其上游设计多个长度的启动子片段,分别克隆到pGL3-basic/luciferase载体中并在HeLa细胞中验证其有效性;③利用生物信息学方法筛选miR-101的候选靶基因,并利用荧光报告载体实验,real-time PCR,western blot实验验证miR-101对靶基因的直接调控作用。④通过HSV-1感染HeLa细胞,利用real-time PCR和western blot实验检测靶基因的mRNA及蛋白水平。【结果】①HSV-1感染HeLa细胞后,miR-101及其前体pre-miR-101-1,pre-miR-101-2的表达水平均有升高,miR-101及pre-miR-101-2升高尤为明显,pre-miR-101-2位于RCL1基因内含子区域,检测发现RCL1表达水平也明显提高;②选择pre-miR-101-2为研究对象构建其启动子,结果显示有启动子活性;③靶基因筛选结果表明,GRSF1和COX2是miR-101的候选靶基因,它们的3’UTR区域包含miR-101的潜在结合位点。荧光报告载体实验,real time PCR实验,Western Blot实验均证明了 miR-101能够直接靶定GRSF1和COX2基因的3’UTR,并且分别发挥着正性和负性调节作用。④HSV-1感染HeLa细胞后,GRSF1和COX2的mRNA水平和蛋白水平都是升高的。【结论】HSV-1感染HeLa细胞后,miR-101的表达水平升高,同时miR-101表达水平的改变主要是源于其前体pre-miR-101-2。我们成功构建了 pre-miR-101-2的启动子,并在HeLa细胞中验证了启动子的活性。在HeLa细胞miR-101中能够直接靶定GRSF1和COX2基因的3’UTR,并且分别发挥着正性和负性调节作用。同时,HSV-1感染也上调了靶基因GRSF1和COX2的表达水平。通过阐明病毒-miRNA间的相互作用机制有助于我们进一步理解病毒和宿主之间的相互联系,同时也为病毒感染的诊断和治疗提供了新依据。