拟南芥一氧化氮(Nitric Oxide,NO)应答突变体F27的筛选分离与相关基因克隆

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一氧化氮(Nitric Oxide,NO)作为一种气体活性分子,广泛存在于动物、植物和微生物中。目前,人们对NO的研究主要是集中在动物和微生物中,在植物中的研究才刚刚起步。研究表明,NO能够促进种子萌发,调节植物根及木质部形成,参与植物成熟和衰老的调控,延迟植物开花,调节气孔开闭运动,介导光信号调节的植物叶片变绿等等一系列生长发育过程,而且在植物的抗病防御反应中也起到重要作用。值得一提的是,NO不仅参与植物对生物和非生物胁迫的反应过程,而且和多种植物激素相互作用,共同调控植物的生长发育。本实验以拟南芥为材料,采用筛选和鉴定NO相关突变体的策略,为深入研究NO在植物体中的作用机理或机制奠定基础。首先,我们用50μMNO供体硝普钠(SNP)处理快中子诱变的种子库,以根作为筛选标记,得到对NO敏感的突变体F27。在NO处理下此突变体根较野生型受到明显抑制,并随着外源NO浓度升高受抑制现象更显著。经过多次验证,该突变体的性状能稳定遗传。另外F27还对ABA敏感,且萌发过程受到抑制。因此突变体F27的获得为研究NO和其它植物激素之间的关系提供一个非常有效的工具。遗传分析证明突变体F27是单基因隐性突变。利用图位克隆技术,突变基因定位于拟南芥第五号染色体上。采取染色体步移技术,确定在遗传图谱100.2-100.4cM之间,其间物理图距为25kb,包含有3个基因及一段长为10KB的序列。通过候选基因相关突变体鉴定,已经得到与F27表型相似的T-DNA插入突变体。突变位点的测序及基因的功能分析正在进行中。
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