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目的: 探讨清心开窍方通过IR/IGF-1R通路对APP/PS1双转基因小鼠认知功能及其海马区Aβ水平的改变 方法: 选用SPF级雄性APP/PS1双转基因小鼠(25±3g)100只,按随机数字表法随机分为5组,模型组,多奈哌齐组,高剂量组,中剂量组,低剂量组,每组20只.另选取同背景雄性C57BL /6J小鼠20只为对照组.所有小鼠于温州医科大学SPF级动物房饲养,适应环境7天后进行灌胃,多奈哌齐组,高剂量组,中剂量组,低剂量组分别服用多奈哌齐溶液(1.67mg/kg/d),清心开窍方高剂量溶液(19g/kg/d),清心开窍方中剂量溶液(9.5g/kg/d)及清心开窍方低剂量溶液(4.75g/kg/d),对照组,模型组分别灌服等体积的生理盐水,连续90天.治疗90天后,采用Morris水迷宫测试小鼠的空间学习记忆能力,包括定位航行实验(逃避潜伏期)和空间搜索实验(穿台次数).Morris水迷宫测试结束后,将各组小鼠经心脏依次灌注生理盐水及4%多聚甲醛固定,用免疫组化法观察IGF-1R,IR,IRS-1及Aβ在小鼠海马CA1区组织神经元中的表达,六胺银染色法检测海马CA1区内Aβ的沉积,Tunel染色法检测海马区神经元细胞的凋亡情况,采用Western Blot检测海马区IGF-1R,IR,IRS-1及Aβ的表达,采用实时荧光定量PCR检测海马区IGF-1R mRNA,IR mRNA,IRS-1 mRNA及AβmRNA的表达. 结果: 1.Morris 水迷宫结果 各组小鼠第1,2天逃避潜伏期比较,差异无统计学意义(P＞0.05);与模型组相比,对照组、多奈哌齐组、清心开窍方高、中剂量组在第3,4,5天逃避潜伏期减少(P＜0.01),清心开窍方低剂量在第4,5天逃避潜伏期减少(P＜0.05),对照组、多奈哌齐组、中药高剂量组跨越平台次数增加(P＜0.01);与多奈哌齐组比较,清心开窍方各组、模型组在第3,4,5天逃避潜伏期延长(P＜0.01),模型组和清心开窍方中、低剂量组跨越平台次数减少(P＜0.01);对照组在第3,4,5天逃避潜伏期减少(P＜0.01),跨越平台次数增加(P＜0.01).与清心开窍方高剂量组相比,低剂量组在第3天逃避潜伏期延长(P＜0.01),跨越平台次数减少(P＜0.01);清心开窍方中剂量组在第3、4、5天逃避潜伏期延长(P＜0.05),跨越平台次数相比无意义(P＞0.05);模型组在第3、4、5天逃避潜伏期延长(P＜0.01),跨越平台次数减少(P＜0.01);对照组、多奈哌齐组在第3天逃避潜伏期减少(P＜0.01),跨越平台次数增加(P＜0.01).与对照组相比,模型组小鼠的运动轨迹紊乱,表明模型组小鼠是以随机的方式来寻找隐藏平台,清心开窍方各组与对照组相似,均表现出选择性搜索平台倾向性且寻找平台路径较模型组相比更短.各组小鼠的运动速度并无明显差异(P＞0.05). 2.六胺银染色的结果 与对照组、多奈哌齐组、清心开窍方高、中、低剂量组相比,模型组小鼠大脑皮质及海马区老年斑阳性数量显著增多(P＜0.01);与多奈哌齐组相比,清心开窍方高、中、低剂量组老年斑阳性数量显著增多(P＜0.01);清心开窍方高剂量组与清心开窍方中、低剂量组相比,老年斑阳性数量有显著性差异(P＜0.01). 3.Tunel染色结果 与对照组、多奈哌齐组、清心开窍方高、中剂量组相比,模型组小鼠大脑海马区凋亡细胞显著增多(P＜0.01);与多奈哌齐组相比,清心开窍方高、中、低剂量组凋亡细胞显著增多(P＜0.01);清心开窍方高剂量组与清心开窍方中、低剂量组相比,清心开窍方中、低剂量组小鼠大脑海马区凋亡细胞显著增多(P＜0.01). 4.免疫组化检测结果 与对照组相比,模型组IGF-1R的表达减少(P＜0.01),IR、IRS-1、Aβ的表达增加(P＜0.01);与多奈哌齐组相比,清心开窍方各组IGF-1R表达减少(P＜0.01,P＜0.05), IR、IRS-1、Aβ的表达增加(P＜0.01,P＜0.05);与高剂量组相比,低剂量组IGF-1R表达减少(P＜0.05), IR、Aβ的表达增加(P＜0.01),中剂量组Aβ表达增加(P＜0.05),IGF-1R、IR、IRS1的表达无差异(P＞0.05). 5.Western Blot检测结果 与对照组比较,模型组 IR、IRS1、Aβ蛋白表达均升高( P＜0.01 , P＜0.05),IGF-1R蛋白表达降低(P＜0.01);与多奈哌齐组比较,清心开窍方高、中、低剂量组海马区IR、IRS1、Aβ蛋白表达均升高(P＜0.01,P＜0.05);与高剂量组比较,清心开窍方中、低剂量组海马区IR、IRS1、Aβ蛋白表达均升高(P＜0.01,P＜0.05),IGF-1R蛋白表达降低(P＜0.01). 6.RT-PCR检测结果 与对照组比较,模型组IR、IRS1、AβmRNA表达均升高(P＜0.01, P＜0.05), IGF-1R mRNA表达降低(P＜0.01);与多奈哌齐组比较,清心开窍方高、中、低剂量组海马区IRS1、AβmRNA表达均升高(P＜0.01,P＜0.05),IGF-1R mRNA表达降低(P＜0.01,P＜0.05);与高剂量组比较,中、低剂量组海马区IRS1、AβmRNA表达升高,清心开窍方高剂量组IR mRNA表达与清心开窍方中、低剂量组相比,无显著性差异(P＞0.05). 结论: 1.不同剂量组清心开窍方均能有效改善AD小鼠的学习记忆能力,且其作用随浓度增加而增强. 2.清心开窍方能降低AD小鼠海马区IR,IRS1,Aβ的表达,并增强IGF-1R的表达,提示清心开窍方可能通过IR/IGF-1R途径来改善AD小鼠的认知能力. 3.不同剂量组清心开窍方均能有效减少AD小鼠大脑海马区神经元细胞的凋亡数量,提示清心开窍方可能具有一定的神经元保护作用.