本试验采用组织块法分离培养奶牛乳腺上皮细胞,采用多种方法纯化细胞。并以细胞为试验模型,采用HPLC、MTT、FCM法检测BMEC在不同Ca2+浓度处理后,单层细胞通透性与细胞凋亡的情况；并研究了不同Ca2+浓度与LPS刺激后细胞因子mRNA、MAPK和NF-κB蛋白的表达。试验一用组织块培养法获得大量奶牛的原代乳腺上皮细胞,联合运用刮除法、相差消化和相差贴壁法、单克隆法可获得纯化的、活力旺盛的乳腺上皮细胞,经形态学鉴定为上皮细胞。用不同Ca2+浓度的培养基孵育细胞,通过HPLC法检测单层细胞通透性。结果表明：降低胞外Ca2+浓度对紧密连接具有破坏作用。试验二通过MTT法检测不同Ca2+浓度对奶牛乳腺上皮细胞增殖的影响。结果表明：各浓度处理组较对照组对细胞增殖均有抑制作用,浓度越低抑制作用越明显；处理细胞48h较24h和72h对细胞增殖的影响更明显。此外,采用FCM法检测不同Ca2+浓度在48h时对细胞凋亡的影响。结果表明：0.45mmol/L浓度组对细胞凋亡和细胞存活率影响最显著。说明降低胞外Ca2+浓度对细胞凋亡具有促进作用。试验三不同Ca2+浓度与LPS组合刺激奶牛乳腺上皮细胞,采用相对实时荧光定量法检测IL-1β、IL-6和IFN的mRNA表达。结果表明：在不同Ca2+浓度与LPS刺激下,三种细胞因子的表达量有所提高,IL-1β与IFN较对照组变化显著,但IL-6变化不明显。此外,采用ELISA法在蛋白水平上检测24h时MAPK和NF-κB蛋白的表达量。结果表明：两种蛋白的表达量均有升高的趋势,但MAPK蛋白变化不明显,NF-κB蛋白表达量变化显著。说明Ca2+能促进乳房炎细胞模型中细胞因子、MAPK和NF-κB蛋白的表达。