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目的：乳腺癌中HER-2基因表达状态直接影响到患者靶向药物Herceptin的应用与否,目前临床HER-2的检测首先选用免疫组织化学(Immunohistochemistry, IHC)技术进行初筛,尤其是对于HER-2表达为2+者,应用荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization, FISH)方法进一步验证有无HER-2基因扩增,有扩增者方适用Herceptin。 FISH方法具有较高的精确性,但在应用方面也存在一定的局限性,例如探针昂贵,需要暗室荧光显微镜下进行观察,荧光容易淬灭,且人工计数困难等。本研究中我们采用实时荧光定量PCR技术(Quantitive Real-time PCR,qPCR)对石蜡包埋非特殊型浸润性乳腺癌标本中HER-2基因mRNA的表达状况进行检测,同时与IHC和FISH相应检测结果进行比较,观察qPCR技术在HER-2基因检测中的特异性和敏感性,以期为检测乳腺癌HER-2基因标找到一种更加简便、可靠、实用的方法。方法：选取山东省千佛山医院病理科2010年1月至2014年6月经手术切除病理明确诊断为非特殊型浸润性乳腺癌的400例乳腺癌组织标本,挑选合适的组织蜡块(有相当比例的浸润癌组织和正常乳腺组织),采用用全自动免疫组化仪进行HER-2免疫组织化学染色,经有经验的病理诊断医师按照新版ASCO/CAP和中国指南HER-2判读标准进行判定,选出结果分别为HER-2 (0、1+、2+、3+)的乳腺癌标本各100例。将入选的病例组织蜡块按厚度3-4μ m进行切片,按照FISH操作规程进行,暗室操作,荧光显微镜下观察、采图并计数,请有经验的病理诊断医师根据新版ASCO/CAP和中国指南判读标准进行评估。将入选的病例组织蜡块以8-10μm连续切片2-3片,烤片后,根据HE染色切片画定肿瘤组织部位进行分割,刮取肿瘤组织至EP管中,脱蜡后进行RNA的提取并进行qPCR扩增检测。将qPCR检测结果与IHC和FISH结果进行对比分析,同时分组比较各自与患者临床病理特征的关系。结果：100例HER-2(0)和HER-2(1+)的标本FISH和qPCR的检测结果均无扩增,符合率100%； 100例(2+)的标本中,FISH检测有20例扩增,阳性率20%,qPCR检测有25例扩增,阳性率25%；100例HER-2(3+)的标本中,FISH检测有92例扩增,符合率92%,qPCR检测有90例扩增,符合率为90%。对四组结果分别用Kappa检验进行一致性分析,IHC检测HER-2(2+)的标本,FISH和qPCR检测结果之间k=0.73(P<0.001),二者一致性强；IHC检测HER-2(3+)的标本,FISH与qPCR检测结果k=0.634(P<0.001),二者具有较好的一致性,同时FISH检测结果92%阳性,qPCR阳性率为90%,二者与IHC检测结果具有较强的一致性。临床病理联系分析表明：qPCR、IHC和FISH所检测的HER-2表达结果均与组织的病理学分级、ER、PR以及Ki67的表达密切相关(P<0.05),三者对乳腺癌患者的临床指标反应具有较好的一致性。结论：非特殊型浸润性乳腺癌患者中采用qPCR方法可以有效的检测HER-2基因的状态,在HER-2 IHC检测为0、1+和3+的乳腺癌患者中,qPCR、FISH二者具有较强的一致性；在IHC表达为HER-2(2+)的乳腺癌标本,qPCR方法和FISH法对HER-2基因的检测亦具有较好的一致性且可以互为补充。