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目的急性白血病(acute leukemia,AL)是一种涉及多种染色体和基因遗传学改变的恶性血液病,特征为骨髓中出现大量分化受阻的异常细胞,其发病机制尚不明确。对肿瘤异常血管新生的研究,可以进一步了解白血病发生与发展的本质,对于提高白血病的诊治水平与改善预后有重要价值。富半胱氨酸61因子(cysteine rich 61,CYR61)(又称血管诱导生成因子61)为CCN家族成员,是一个早期即刻基因,广泛表达于多种肿瘤。体内外实验均显示CYR61的过度表达有促肿瘤细胞的增殖和迁移的作用。消化系统肿瘤和乳腺癌的研究结果提示,它可能参与肿瘤的发生、血管生成和肿瘤浸润有关,影响预后。因此,CYR61的过度表达可能是肿瘤发生发展进程中一个普遍且重要的阶段,在白血病的发生机制中也可能有一定的作用。目前,尚未见CYR61在急性白血病中表达研究的报道。本实验探讨了急性白血病中CYR61蛋白的过度表达与VEGF异常表达的可能关系,以及与急性白血病化疗效果、预后因素及髓外浸润之间的关系,为进一步研究CYR61在白血病发生中的作用机制提供理论基础。方法1.研究对象2007年6月至2008年4月山东大学齐鲁医院血液科收治的初发AL患者48例及对照者10例。48例AL患者其中男26例,女22例,中位年龄40岁(17-65岁),按不同标准分组①急性髓细胞白血病(acute myelocytic leukemia,AML)28例,急性淋巴细胞白血病(acute lymphoid leukemia,ALL)20例。②发生组织浸润者22例,无组织浸润者26例。2.研究方法采用RT-PCR和免疫组化技术分别检测48例AL患者及10例对照者骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cell,BMMNC)中CYR61和VEGF在mRNA水平及蛋白水平的表达。3.统计学处理所有数据均用SPSS13.0统计软件分析。数据采用中位数、(?)±SD、百分率表示。两组间均数比较采用t检验。多组间均数比较采用方差分析。多个变量采用多元逐步回归法分析。计数资料采用χ~2检验,以α=0.05作为显著性水准。统计学显著性差异检验水准为p＜0.05(双侧)。结果1.经RT-PCR检测(1)AL患者CYR61和VEGF基因的表达水平明显高于正常对照组(p＜0.05),两者的表达水平呈正相关(r=0.2718,p＜0.05)。(2)AML和ALL组CYR61和VEGF基因表达水平明显高于正常对照组(p＜0.05);AML各亚型CYR61和VEGF基因表达水平无显著性差异(p＞0.05)。(3)治疗后达CR患者治疗前CYR61和VEGF基因表达水平低于NCR患者(p＜0.05)。(4)发生组织浸润患者组与无组织浸润患者组CYR61和VEGF基因的表达有显著统计学意义(p＜0.05),浸润组CYR61和VEGF的表达高于无浸润组。(5)AL患者CYR61基因表达水平与骨髓原始细胞百分比(r=0.3961,p＜0.05)、VEGF基因表达水平(r=0.2718,p＜0.05)、外周血白细胞数呈正相关(r=0.2319,p＜0.05);与外周血血小板计数呈负相关(r=-0.3723,p＜0.05);AL患者VEGF基因表达水平与骨髓原始细胞百分比(r=0.3571,p＜0.05)、外周血白细胞数(r=0.2116,p＜0.05)呈正相关;与外周血血小板计数(r=-0.4534,p＜0.05)呈负相关。2.经免疫组织化学染色(1)CYR61蛋白主要表达于胞浆中,胞核内也可见少许表达;VEGF蛋白主要表达于胞浆中,胞核内也可见少许表达(见附图)。(2)CYR61在AL中的表达率87.5%(42/48)明显高于对照组中的40%(4/10),二者之间差异具有统计学意义(p＜0.05);VEGF在AL中的表达率75%(36/48)明显高于对照组中的20%(2/10),二者之间差异具有统计学意义(p＜0.05)。(3)经χ~2检验,AL中CYR61与VEGF表达有关(χ~2=4.406,p＜0.05)。(4)CYR61的表达与白细胞数量、血红蛋白数量及骨髓原始细胞数有关(p=0.036,p=0.012,p=0.005)。结论1.急性白血病患者中CYR61和VEGF表达明显升高。CYR61和VEGF表达水平与疗效呈负相关。其表达水平的高低可作为AL观察临床疗效及预后的指标之一。2.CYR61和VEGF表达率与骨髓原始细胞比例呈正相关,这可能与肿瘤负荷有关。3.CYR61和VEGF的过度表达参与了白血病的发生发展,或许可作为生物治疗作用的新靶点。4.急性白血病的组织浸润机制可能与CYR61和VEGF表达升高有关。5.CYR61与VEGF表达相关,表明两者在调控血管生成的过程中存在协同效应,提示CYR61通过调节VEGF表达的途径影响肿瘤血管生成。