添加不同氨基酸培养对蛇足石杉叶状体的增殖和石杉碱甲累积与抗氧化酶响应的研究

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为探索添加前体物对蛇足石杉叶状体提高生产累积石杉碱甲的效应和抗氧化酶系的生化特征及其关系,本文通过在蛇足石杉叶状体培养基中添加不同浓度的天冬氨酸、赖氨酸和色氨酸溶液,检测叶状体中抗氧化酶生化差异,并分析了添加不同氨基酸对叶状体增殖与石杉碱甲累积的作用及其关系,结果如下:1.添加色氨酸溶液培养的叶状体相对增殖率较天冬氨酸和赖氨酸高,其中以浓度为1mmol·L-1色氨酸溶液的叶状体鲜重相对增殖率最高。但另一方面,添加天冬氨酸对叶状体的相对增殖率与对照无显著差异,且添加天冬氨酸对叶状体干重累积明显高于对照18.50%25.75%,亦高于色氨酸处理。2.添加天冬氨酸溶液培养的叶状体中石杉碱甲含量明显高于其他处理组和对照组,其中以添加0.5 mmol·L-1溶液的石杉碱甲含量最高,为97.239μg·g-1。添加赖氨酸溶液培养的叶状体中石杉碱甲含量最高为61.398μg·g-1;添加色氨酸溶液培养的叶状体中石杉碱甲含量最高为70.801μg·g-1;对照组石杉碱甲含量为76.254μg·g-1。分析显示,添加色氨酸培养的叶状体中石杉碱甲的含量与对照接近,添加赖氨酸抑制叶状体中石杉碱甲的累积。3.SOD酶活性检测显示:添加天冬氨酸溶液培养叶状体至50天时,除0.25mmol·L-1外,SOD酶活性均高于对照,添加0.5 mmol·L-1天冬氨酸培养的叶状体其他时期的SOD酶活性变化规律与对照相似;添加0.25 mmol·L-1赖氨酸溶液不同时期SOD酶活性均明显高于对照,且变化规律与对照不同。POD同工酶电泳检测显示:添加0.5 mmol·L-1天冬氨酸至收获期间,POD同工酶酶带与对照不同,同工酶分子表达量增多;添加1 mmol·L-1色氨酸至收获期间,POD同工酶酶带与对照不同,但分子表达量与对照相似。CAT酶活性检测显示:添加0.5 mmol·L-1天冬氨酸50天70天时CAT酶活性与对照相似,添加不同浓度天冬氨酸80天时CAT酶活性均高于对照;其中添加0.5 mmol·L-1天冬氨酸,CAT酶活性明显高于对照及其他处理组。综上所述,添加前体物天冬氨酸可有效促进叶状体干重和石杉碱甲的累积,其中以0.5 mmol·L-1天冬氨酸处理效果最好,较对照提高了1.27倍。该处理叶状体中SOD酶活性变化规律与对照组类似,仅在培养50天时活性明显高于对照;该处理60天时POD同工酶酶带与对照不同,且同工酶分子表达量增多;该处理80天时CAT酶活性明显高于对照。添加0.5 mmol·L-1天冬氨酸的叶状体中SOD酶、POD酶、CAT酶活性在不同阶段变换强于对照,这种抗氧化酶系各角色酶活交替加强的协调特征与叶状体累积石杉碱甲的提高存在明显的联系。
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