研究目的:初步探究戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是否可以感染血小板,并促进血小板的活化及外泌体的分泌。血小板分泌的外泌体是否能够促进HEV的传播。研究方法:本研究通过建立HEV扩增培养体系和HEV RNA qRT-PCR检测方法,收集HEV病毒液并检测HEV核酸浓度。将健康人洗涤血小板与HEV共培养,运用qRT-PCR检测血小板中HEV RNA载量并绘制生长曲线,间接免疫荧光法检测血小板中HEV ORF2蛋白;流式细胞术检测血小板表面CD41a和CD62p分子的表达;运用差速离心法和免疫磁珠法分离并纯化HEV或PBS作用后的血小板分泌的外泌体,qRT-PCR和ELISA分别检测两组外泌体中HEV RNA和HEV抗原;将两组外泌体感染PLC/PRF/5细胞,qRT-PCR和间接免疫荧光法分别检测PLC/PRF/5 细胞中 HEV RNA 和 HEV ORF2 蛋白。研究结果:结果发现当HEV浓度为4×109copies/mL,共孵育时间为24h时,血小板结合或内化的病毒量最高为(2.34±0.39)×107 copies/mL;血小板在培养过程中,血小板结合或内化的病毒总量,第1天低于第0天,差异有统计学意义(P<0.001)。在第1天至第5天,病毒载量基本稳定在107copies/mL;随着时间的增加,CD41a和CD62p双阳性细胞比例增加约10-20%。在每个时间点,实验组比对照组平均增加约4%(P<0.01);与HEV孵育后的血小板分泌的外泌体中含有HEV核酸及蛋白组分,将阳性外泌体感染PLC/PRF/5细胞后发现PLC/PRF/5细胞中HEV核酸及蛋白呈阳性反应。研究结论:HEV可以进入血小板,但HEV进入血小板的机制及是否在血小板内复制还需进一步研究;HEV可以促进血小板的活化及外泌体的分泌;经HEV作用的血小板分泌的外泌体可以介导HEV在PLC/PRF/5细胞中的传播。