番石榴多糖的分离纯化、结构鉴定及生物活性测试

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本论文以新鲜的番石榴(Psidium guajava Linn)果实为原料,对其多糖组分的提取、分离、纯化、结构鉴定进行了较系统的研究并对其生物活性进行测试。新鲜番石榴果实经热水提取,分级醇沉,残渣通过稀碱提取醇沉,得到四个部位的粗多糖。各部位粗多糖经过脱蛋白,透析,冻干。苯酚-硫酸法测得水提/碱提脱蛋白多糖P50、P70、P90和AP的含量分别为:62.7%,70.3%,31.6%,21.6%。以上粗多糖经DEAE-Cellulose52分离纯化得到9个多糖组分:P50-1、P50-2、P70-1、P70-2、P70-3、P90-1、P90-2、AP-1、AP-2,部分组分再经凝胶柱SephacrylS-100HR、Sephacryl S-300HR和Sephadex G-75柱进一步分离纯化,得GP70-2、GP70-3、GP90-1A、GP90-1B、GP90-2、GAP-1六个均一多糖。通过旋光度测定、紫外扫描、高效凝胶渗透色谱、液相色谱、气相色谱、甲基化分析、红外光谱、核磁共振波谱等方法对均一多糖进行了结构分析。多糖GP70-2、GP70-3、GP90-1A、GP90-1B、GP90-2、GAP-1的旋光度[α]25D分别等于+101°、+90°、-72°、+234°、-71°、-249°;紫外扫描结果显示各多糖都不含有核酸和蛋白质;高效凝胶渗透色谱法测得的相对分子量分别为7.4×104、10.6×104、1.4×104、13.7×104、>140×104和6.9×104Da;其中GP70-2是由半乳糖和阿拉伯糖组成,重复单元结构中主链由(1→3)-α-L-阿拉伯糖和(1→3,6)-β-D-半乳糖组成,支连由(1→6)-β-D-半乳糖和(1→)-β-D-半乳糖组成。GP70-3是由鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、半乳糖、阿拉伯糖组成,重复单元结构中主链由(1→5)-α-L-阿拉伯糖、(1→6)-β-D-半乳糖、(1→3)-β-D-半乳糖、(1→3,6)-β-D-半乳糖组成,支连由(1→2,3,5)-α-L-阿拉伯糖、(1→3)-α-L-阿拉伯糖、(1→3)-β-D-鼠李糖、(1→3)-β-D-葡萄糖醛酸、(1→3)-β-D-半乳糖醛酸和(1→)-β-D-半乳糖组成。GP90-1A是由(1→6)-α-D-葡萄糖组成葡聚糖。GP90-1B由葡萄糖和阿拉伯糖组成,重复单元结构中主链由(1→5)-α-L-阿拉伯糖、(1→2,3,5)-α-L-阿拉伯糖(1→3)-α-L-阿拉伯糖组成,支链由(1→6)-β-D-葡萄糖和(1→)-β-D-葡萄糖及(1→)-α-L-阿拉伯糖组成。GAP-1是由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖组成,主链由(1→3,6)-β-D-半乳糖和(1→6)-β-D-半乳糖组成,支连由(1→2,3,5)-α-L-阿拉伯糖、(1→3)-α-L-阿拉伯糖、(1→3)-β-D-鼠李糖、(→1)-β-D-葡萄糖醛酸、(→1)-β-D-葡萄糖和(→1)-β-D-甘露糖组成。生物活性测试:DPPH.自由基清除实验结果显示:GP70-2浓度为10mg/ml时,DPPH.自由基清除率为47.6%;GP70-3浓度为1mg/ml时,DPPH.自由基清除率为16.5%;GP90-1B浓度为9mg/ml时,DPPH.自由基清除率为21.3%。OH.自由基清实验结果显示:GP70-2浓度为9mg/ml时,OH.自由基清除率为47.7%。GP70-3浓度为9mg/ml时,OH.自由基清除率为32.3%。 GP70-2、GP70-3和GP90-2有一定的α-葡萄糖苷酶活性抑制作用,浓度为5mg/mL时,它们的抑制率分别为46.3%、39.8%和48.8%。
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