腐败希瓦氏菌噬菌体的性质和防腐应用研究

来源 :中国海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:llt009
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我国水产品资源丰富,种类繁多,是世界上较大的水产品养殖和贸易大国之一。近年来,随着人们生活水平的日益提高,水产品因其低脂肪、高蛋白的特点越来越受到人们的欢迎。随之而产生的是,人们对水产品的鲜度要求也越来越高。微生物的生长和代谢是水产品腐败变质的主要原因。水产品中只有部分微生物参与腐败,这些细菌就叫做该水产品的特定腐败菌,抑制水产品特定腐败菌的生长可以有效防止水产品的腐败。噬菌体是一类能够感染细菌的病毒,体积微小,结构简单,主要由蛋白质衣壳和内部包裹的核酸组成。噬菌体具有严格的寄生性,广泛分布于自然界,能够专一性的裂解细菌,安全性好,对机体及环境无毒副作用。已有先例将噬菌体用于食品的贮存。本论文首先从污水中分离一株腐败希瓦氏菌噬菌体并对其生理特性进行研究,然后研究分离得到的腐败希瓦氏菌噬菌体的抑菌活性及理化因素对噬菌体抑菌活性的影响,最后研究腐败希瓦氏菌噬菌体对4℃冷藏牙鲆的防腐性能。主要的实验结果如下:1以腐败希瓦氏菌Sp225为宿主菌从污水中分离了一株腐败希瓦氏菌噬菌体Spp001,该噬菌体裂解性好,能够在4-5h内使腐败希瓦氏菌菌悬液变澄清,经双层平板法检测得到清晰透明的噬菌斑。对该噬菌体的生理特性研究可知该噬菌体核酸类型为DNA,其形态符合长尾噬菌体科的基本特征,为蝌蚪形,具有宽度约为50nm的正多边形头部和长约150nm的尾部。该噬菌体的最佳感染复数为10,一步生长曲线显示噬菌体感染宿主菌潜伏期为10min,爆发期为20min,裂解量为98。2对腐败希瓦氏菌噬菌体Spp001进行抑菌实验,以培养基和鱼肉汤为基质时,噬菌体Spp001均能抑制腐败希瓦氏菌Sp225的生长,保持基质澄清。以培养基为基质时,浓度为102pfu/mL的噬菌体Spp001不能完全抑制腐败希瓦氏菌的生长,基质OD600nm缓慢上升,细菌缓慢生长;以鱼肉汤为基质时,浓度为106pfu/mL和107pfu/mL的噬菌体均能抑制腐败希瓦氏菌的生长,而保持鱼肉汤基质的澄清。温度对噬菌体抑菌活性有影响,腐败希瓦氏菌噬菌体40℃作用60min存活率为79.2%,60℃作用60min后效价仍达到8.0×104pfu/mL,温度大于70℃噬菌体失去裂解活性。腐败希瓦氏菌噬菌体在pH为7时抑菌活性最高,此时效价为1.6×108pfu/mL;噬菌体耐碱性较好,耐酸性较差,在pH为3时,噬菌体已失去裂解性。腐败希瓦氏菌噬菌体Spp001对含氯消毒剂氯胺和次氯酸钠具有较强的抗失活能力。10mg/L-20mg/L的氯胺仅能使噬菌体的活性降低3%,1g/L-2g/L能使噬菌体的活性降低约12.5%,500mg/L-600mg/L次氯酸钠能够灭活腐败希瓦氏菌噬菌体12.5%,5g/L-6g/L次氯酸钠能够灭活腐败希瓦氏菌噬菌体22.1%。3KGray电子束辐照使噬菌体效价和抑菌活性稍有降低,存活率为96.5%,5KGray电子束辐照明显降低了腐败希瓦氏菌的效价和抑菌活性,存活率为21.5%,当辐照剂量大于7KGray时,噬菌体Spp001失去抑菌活性。3腐败希瓦氏菌噬菌体Spp001对冷藏牙鲆的抑菌防腐实验效果明显。感官鉴定明显看出噬菌体抑菌防腐效果良好,明显高于未经噬菌体处理的对照组。通过对微生物指标的测定可知,腐败希瓦氏菌噬菌体Spp001实验组和山梨酸钾溶液实验组的菌落总数和腐败希瓦氏菌菌落总数均明显低于对照组,并且高浓度Spp001噬菌体实验组菌落总数和腐败希瓦氏菌菌落总数均小于山梨酸钾溶液实验组,同时也小于低浓度Spp001噬菌体实验组。噬菌体Spp001实验组和山梨酸钾实验组的pH先降低后升高的趋势比对照组缓慢很多,且实验组pH的变化趋势由大到小分别为高浓度的噬菌体Spp001实验组>山梨酸钾溶液实验组>低浓度的噬菌体Spp001实验组。对鱼肉挥发性盐基氮的测定表明,实验组明显低于对照组,且高浓度噬菌体实验组和山梨酸钾实验组在第十四天仍小于30mg/100g,表明高浓度噬菌体处理的鱼肉未发生腐败。本实验分离得到的一株腐败希瓦氏菌噬菌体Spp001,裂解能力较强,且对理化性质的耐受力较强,将噬菌体Spp001应用于冷藏牙鲆的防腐实验,效果明显。
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