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具有免疫刺激功能的胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸序列(CpG序列)是一种重要的肿瘤免疫治疗药物,但是游离的CpG序列难以进入细胞且易被DNA酶降解。DNA纳米结构由于其结构多样性,合适的尺寸和无毒性,近年作为药物运输载体受到越来越多的关注。本论文中我们利用DNA树枝状结构携载CpG,提高复合纳米结构进入细胞的效率,达到最佳的免疫刺激效果。1.DNA树枝状大分子运输免疫刺激剂CpG我们设计得到装载CpG的DNA树枝状大分子,然后利用MTT细胞活力测定实验验证DNA树枝状大分子的低细胞毒性。利用共聚焦显微镜观察运载CpG的DNA树枝状大分子的细胞内化效果,DNA树枝状大分子运载的CpG比单链CpG更易进入细胞。酶联免疫吸附反应检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)释放水平,DNA树枝状大分子运载的CpG序列能够引起更高的免疫因子释放。2.功能化DNA树枝状大分子应用于CpG的运输和免疫治疗我们设计得到TAT修饰的功能化DNA树枝状大分子结构,利用这个功能性结构作为载体运输发夹状的CpG。利用流式细胞术和共聚焦显微镜研究运载CpG的DNA树枝状大分子的细胞内化效果及胞内定位,TAT修饰的DNA纳米载体运载的CpG能够更有效率的穿过细胞膜并在内含体中聚集。酶联免疫吸附反应检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)释放水平,TAT肽修饰的DNA树枝状大分子引起最高的免疫因子释放,并且装载发夹状CpG的功能化DNA纳米结构比装载单/双链CpG,引起的免疫因子释放水平更高。研究表明,DNA树枝状大分子能够有效增加细胞对于CpG的摄取,TAT肽能够增强载药DNA树枝状大分子进入细胞的能力,功能化的DNA树枝状大分子纳米体系能更有效的刺激细胞因子的释放,激活免疫反应。而发夹状的CpG粘性末端的封闭使其整体结构更加稳定,引起的免疫反应更强。TAT肽修饰的DNA树枝状大分子在肿瘤免疫治疗中是很有前景的药物递送载体。