背景与目的食管癌（Esophageal cancer,EC）是我国常见的消化道恶性肿瘤之一,发病率约占全国所有新发肿瘤的7.1%,死亡率约占全国所有肿瘤死亡率的10%,发病率及死亡率常年居于高位。在组织学上可分为:食管鳞状细胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）和食管腺癌（Esophageal adenocarcinoma,EAC）。EC在发病早期无或只有轻微临床症状,当出现明显的进行性吞咽困难症状时,往往已经进入中晚期,患者的生活质量大大降低。因此找到与食管癌相关的危险因素,对食管癌的防治有着重要意义。幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）是一种能够在胃内定植的革兰氏阴性致病菌,这种细菌的感染被证实与多种胃部疾病有关,例如:消化性溃疡、慢性胃炎、胃癌、胃淋巴瘤等。但它感染与胃的邻近器官-食管疾病的关系尚不明确。据研究报道,H.pylori的感染与EAC呈负相关,是EAC的保护因素,而在我国对食管癌高发地区的研究则提示H.pylori感染是ESCC的高危因素。因此,本课题拟通过体内外实验探究H.pylori感染对ESCC的发生发展的作用,进而为ESCC的防治提供新思路。材料与方法材料（1）组织样本:食管癌患者的远端切缘黏膜（15例）以及癌组织（13例）新鲜样本提取DNA,用于PCR检测食管癌中H.pylori的感染。课题组前期收集来自汕头大学医学院附属肿瘤医院病理科50例ESCC患者未经放化疗的手术后标本,用于免疫组化,术后标本均经临床病理医生确诊为食管癌。分别取癌、癌旁黏膜、远端切缘黏膜组织,根据组织病理分型,分为正常上皮（50例）,上皮内瘤变（38例）,食管鳞癌（50例）,共计组织样本138例。（2）细胞及菌株样本:NE6食管永生化细胞系由香港大学曹世华教授馈赠,H.pylori菌株由课题组前期分离培养经测序鉴定证实为幽门螺杆菌。方法（1）检测食管癌患者H.pylori的感染:通过聚合酶链反应（PCR）扩增28例食管组织DNA样本（远端切缘黏膜15例以及癌组织13例）H.pylori特异的CagA基因,并通过荧光原位杂交（H.pylori探针）在石蜡标本中验证PCR结果。（2）H.pylori菌株对NE6细胞的影响:采用H.pylori菌株与NE6细胞体外共培养,并通过特殊染色及显微镜观察H.pylori对NE6细胞形态的影响,通过CCK-8检测H.pylori对NE6细胞增殖的影响,通过免疫荧光检测NE6细胞中8-OHdG及53BP1的表达情况,通过转录组测序检测H.pylori对NE6细胞m RNA转录水平的影响并对差异表达基因进行筛选。（3）对差异表达基因在食管癌变过程的表达情况检测:通过免疫组化对差异表达基因—凋亡抑制蛋白3（BIRC3）在食管癌变不同阶段的表达情况进行检测。结果（1）28例样本中有10例样本CagA基因阳性,并通过荧光原位杂交在4例样本中检测到H.pylori的荧光信号。（2）在细胞与细菌共培养后,能够观察到H.pylori粘附在NE6细胞周围及间隙,并引起细胞的空泡化,相较于对照组8-OHdG入核表达,53BP1由核内散在表达变为点灶状聚集。在一定条件下,不同的菌株能够不同程度的促进细胞增殖。（3）转录组测序筛选到差异表达基因共计788个,其中上调基因508个,下调基因284个（|log2（Fold Change）|>2,padj<0.001）。通过对差异基因的功能和通路富集,上调基因主要参与了应对氧水平下降、凋亡、细胞间粘附、白细胞活化、血管生成等功能,并富集到肿瘤及炎症等相关通路;下调基因主要参与了角化、I型干扰素信号通路等功能,并富集到阿米巴病、β-丙氨酸代谢等通路。进行DO数据库富集,这些基因主要与肿瘤及炎症性疾病相关,并且能显著富集到食管肿瘤。（4）差异基因中BIRC3被显著上调,免疫组化显示BIRC3随着ESCC癌变过程的发生发展表达也逐渐增加,各组间存在明显差异（P<0.001）。结论食管组织中可以存在H.pylori的感染。H.pylori在感染NE6细胞后能粘附于细胞表面、引起细胞形态变化、促进细胞增殖、引起DNA损伤、基因转录水平的广泛改变,这些差异基因主要参与了应对氧水平下降、凋亡、细胞间粘附、白细胞活化、血管生成等功能。