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猪白细胞介素-2(IL-2)和γ-干扰素(IFN-γ)是猪体内重要的细胞因子,在猪抗病和免疫应答反应中占有重要地位。本实验将广西巴马小型猪外周血淋巴细胞在刀豆球蛋白A(Con A)的刺激下体外培养15h后,提取激活的淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR技术扩增出猪IL-2cDNA和IFN-γ cDNA,克隆到pMD18-T载体上并测序。测序结果显示:克隆的IL-2 cDNA全长为513个碱基,开放阅读框(ORF)为465个碱基,编码154个氨基酸。与报道其它品种猪的IL-2同源性为100%。克隆的的IFN-γ cDNA全长为556个碱基,开阅读框(ORF)为501个碱基,编码166个氨基酸。与报道其它品种猪的IFN-γ同源性为100%。证实克隆到了巴马小型猪IL-2基因和IFN-γ基因的cDNA。 为了亚克隆编码猪IL-2和IFN-γ成熟蛋白基因,设计两对引物。扩增产物分别命名mIL-2和mIFN-γ。为了检测目的蛋白的表达,设计另外两对引物,使这两对引物带上21个核苷酸组成的血凝素序列,可以通过检测血凝素标签来检测融合蛋白的表达,将扩增带上血凝素的猪IL-2和IFN-γ成熟蛋白基因分别命名为HA-mIL-2和HA-mIFN-γ。将猪mIL-2、mIFN-γ、HA-mIL-2和HA-mIFN-γ插入PET质粒上,构建了原核表达质粒PET-mIL-2、PET-HA-mIL-2、PET-mIFN-γ和PET-HA-mIFN-γ,并转化大肠杆菌BL21,以BamHI/HindⅢ酶切筛选鉴定转化子,用IPTG诱导融合蛋白表达。通过SDS-PAGE分析,PET-mIL-2、PET-HA-mIL-2在34KD处出现融合蛋白条带,PET-mIFN-γ和