[目 的]通过体外实验探究低氧条件下14-3-3σ蛋白对肿瘤促进因子——低氧诱导因子1α(Hypoxia-inducible factor 1α,HIF1α)蛋白的调控作用并初步探求其分子机制;[方法]1.通过生物信息学分析14-3-3σ在结肠癌中的表达情况及对结肠癌患者生存预后的影响,通过Western blotting验证14-3-3σ在结肠癌细胞系中的表达情况;2.通过Western blotting方法筛选低氧下能稳定诱导表达HIF1α蛋白的结肠癌细胞株;3.在筛选出的结肠癌细胞株DLD1及HCT15中转染14-3-3σ过表达质粒(pCMV5-FLAG-14-3-3σ),经低氧刺激后通过qRT-PCR及Western blotting方法分别在mRNA及蛋白水平验证其对HIF1α调控作用;使用14-3-3σ的敲低质粒(pLKO.1-shSFN)包装成慢病毒对结肠癌细胞DLD1进行感染,反向验证敲低14-3-3σ后对HIF1α蛋白的调控作用;4.低氧条件下在14-3-3σ过表达DLD1细胞株中使用蛋白稳定性测定实验检测其对HIF1α蛋白稳定性的影响;通过体外泛素化蛋白纯化方法检测低氧条件下14-3-3σ对HIF1α蛋白泛素化水平的影响。[结果]1.14-3-3σ在结肠癌中一般为低表达,且14-3-3σ低表达与CRC患者不良预后相关;2.1%O2低氧条件下,结肠癌细胞DLD1及HCT15中HIF1α蛋白表达量随时间逐渐积累增高;3.1%O2低氧条件下,14-3-3σ过表达细胞株DLD1及HCT15中14-3-3σ能抑制HIF1α蛋白的积累;而在DLD1细胞株中敲低14-3-3σ后,HIF1α蛋白累积表达相比对照组明显增加。4.1%O2低氧条件下,过表达的14-3-3σ可以影响DLD1细胞株中HIF1α的mRNA表达,但其表达与蛋白不一致。5.1%O2低氧条件下,过表达14-3-3σ在DLD1细胞中显著降低HIF1α蛋白稳定性;14-3-3σ抑制HIF1α蛋白表达的机制之一可能是增强HIF1α蛋白泛素化水平,通过蛋白酶体途径降解HIF1α来抑制其表达。[结 论]本研究证实了低氧条件下14-3-3σ抑制结肠癌中HIF1α蛋白的表达,并且证实泛素蛋白酶体途径为可能的调控机制。