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1 目的 中风病是中老年人的常见病,多发病,严重危害人类健康。中医认为气血逆乱,脉络闭阻,脏腑气机失调,为中风的发病机制。益脑通络胶囊是依据王清任“补阳还五汤”的思路,大胆创新,注重益气活血的同时突出了“痰瘀生毒,毒损脑髓”的理论,重用解毒之品,拓展了中风辨治的新理论、新思路。我们采用不同的实验方法,研究中药益脑通络胶囊对大鼠局灶性脑缺血的治疗作用、量效关系,并观察益脑通络胶囊对肠系膜微血管血栓形成的预防作用和对内毒素诱导的大鼠 TXB2、6-K-PGF1α 含量、TNF-α 和 IL-2 含量、白细胞粘附、血液流变性的影响、对缺血再灌注大鼠弥散加权像和能量代谢的影响以及光化学诱导脑缺血大鼠碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及其机制,以探讨益脑通络胶囊对缺血性中风的神经细胞保护作用。2 方法2.1 采用光化学诱导的大鼠局灶性脑缺血方法,设模型组、益脑通络胶囊大、中、小剂量治疗组和步长脑心通胶囊对照组,于造模成功后 3h 始,给予益脑通络胶囊灌胃,连续 5d,动态观察体重及神经功能评分的变化。术后第 5d 取脑,TTC 染色后计算梗塞灶体积,HE 染色后观察病理学改变。2.2 采用光化学诱导的大鼠肠系膜微血管血栓形成方法,设模型组、益脑通络胶囊小、中、大剂量组和步长脑心通胶囊对照组,实验前每日给予益脑通络胶囊灌胃,连续 5d,于第 6d观察益脑通络胶囊对肠系膜微血管血栓形成的影响。2.3 采用内毒素诱导方法,设正常组(供检测 TNF-α 和 IL-2)、益脑通络胶囊大、中、小剂量组、步长脑心通胶囊对照组和模型组,实验前每日给予益脑通络胶囊灌胃,连续 5d,于第 6d由股静脉注射内毒素 0.1ml/100g 体重,2h 后取静脉血 3ml 注入试管中,以测定血清中的 TNF-α和 IL-2 含量。2.4 采用内毒素诱导方法,设正常组(供检测 TXB2 和 6-Keto-PGF1α)、益脑通络胶囊大、中、小剂量组、步长脑心通胶囊对照组和模型组,实验前每日给予益脑通络胶囊灌胃,连续 5d,于第 6d 由股静脉注射内毒素 0.1ml/100g 体重,2h 后取静脉血 3ml 注入试管中,以测定各组动物血浆中 TXB2和 6-Keto-PGF1α 的含量。2.5 采用大鼠肠系膜微血管血栓形成方法,设正常对照组、益脑通络胶囊大、中、小剂量组、步长脑心通胶囊对照组和模型组,实验前每日给予益脑通络胶囊灌胃,连续 5d,于第 6d 由股静脉注射内毒素 0.1ml/100g 体重,以观察益脑通络胶囊对白细胞粘附(正常组除外)和血液流变性的影响。2.6 用免疫组化方法观察光化学诱导的脑缺血大鼠第 5d 时,脑内 bFGF 在治疗组、模型组,假手术组、空白组的表达。2.7 采用脑缺血再灌注损伤大鼠方法,设空白组、模型组和益脑通络胶囊治疗组,实验前每日给予大鼠益脑通络胶囊灌胃,连续 5d,于造模 3h 和第 5d 行 MRI 和 MRS 检查,以观察益脑通络胶囊对缺血再灌注大鼠弥散加权像和能量代谢的影响。<WP=6>4 益脑通络胶囊对缺血性中风神经细胞保护作用的实验研究3 结果3.1 益脑通络胶囊可以减小光化学诱导的大鼠局灶性脑梗死体积,其中大剂量组及中剂量组的梗死灶体积分别为 6.13±1.27 mm3、12.98±1.43 mm3 明显小于对照组 22.20±3.89 mm3(P<0.01),小剂量组与对照组梗塞体积差异不显著(P>0.01);治疗组各剂量组梗塞体积随给药剂量的增加而减小,呈现一定比例的量效关系。3.2 益脑通络胶囊各剂量组对血栓形成时间在光照后均较模型组长(P<0.01),与步长脑心通组无差异;而血栓占管腔面积在光照后益脑通络胶囊各剂量组均比模型组明显减小(P<0.01),其中中剂量组(2159.12±526.76μm2)缩小血管堵塞面积优于步长脑心通组(3446 ±560.05μm2)(P<0.05)。3.3 益脑通络胶囊各剂量组与步长脑心通胶囊对照组均可明显抑制 TNF-α 的产生,与模型组相比差异显著(P<0.05);其中益脑通络胶囊大剂量组(0.20±0.11ng/ml)、中剂量组(0.29±0.05ng/ml)与步长脑心通胶囊对照组(0.57±0.13ng/ml)相比具有显著性差异(P<0.01);同时,益脑通络胶囊各剂量组与步长脑心通胶囊对照组均可提高机体 IL-2 的表达,与模型组相比有显著性差异(P<0.05)。3.4 益脑通络胶囊各剂量组和步长脑心通组对照组均能明显抑制 TXB2的合成(P<0.05),其中益脑通络胶囊各剂量组与步长脑心通组相比,具有显著性差异(p<0.01);而益脑通络胶囊大剂量组(391.40±180.90ng/ml)、中剂量组(247.33±38.40ng/ml)能明显提高 6-Keto-PGF1α的含量,与模型组和步长脑心通组相比有显著性差异(p<0.01)。3.5 正常对照组大鼠肠系膜细动、静脉及毛细血管血流快而呈线粒流,无红细胞聚集,细静脉内偶见少数白细胞贴壁滚动,无白细胞粘着。模型组血流状态明显比益脑通络胶囊各剂量组和步长脑心通组缓慢(P<0.01),多为粒流和血液停滞之间,而益脑通络胶囊各剂量组和步长脑心通组多为线流和粒流之间。白细胞粘附数量,益脑通络胶囊各剂量组和步长脑心通组均较模型组明显减少(P<0.05)。全血粘度的变化,益脑通络胶囊的大、中剂量组大鼠 2h 后全血 4 个切变率的粘度均比步长脑心通组低,具有极显著性差异(P<0.001);红细胞聚集指数,益脑通络胶囊大?