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目的将乙肝病毒X基因(HBV X)导入人源性永生化非瘤性肝细胞株QSG7701细胞,观察稳定转染后QSG7701细胞中DNMT3A/3B的表达情况。方法①本研究室前期构建好的重组表达质粒pcDNA-X及空载体pcDNA3.0分别转染QSG7701细胞,经含G418的选择性培基筛选获得稳定转染HBV-X基因的细胞克隆(pcDNA-X/QSG7701)及稳定转染空载体pcDNA3.0的细胞克隆(pcDNA3.0/QSG7701)。RT-PCR, Western blot分别检测转染细胞中HBX mRNA和HBx蛋白的表达。②Real time-PCR检测pcDNA-X/QSG7701细胞、pcDNA3.0/QSG7701细胞、QSG7701细胞中DNMT3A/3B mRNA的表达差异。③免疫细胞化学方法检测pcDNA-X/QSG7701细胞、pcDNA3.0/QSG7701细胞、QSG7701细胞中DNMT3A/3B蛋白的表达差异。结果①RT-PCR, Western blot检测显示重组表达质粒pcDNA-X转染的QSG7701细胞(pcDNA-X/QSG7701)中有HBV X mRNA及HBx蛋白的稳定表达。②Real time-PCR检测显示：pcDNA-X/QSG7701与pcDNA3.0/QSG771、未转染的QSG7701细胞相比,DNMT3A/3B mRNA表达均显著升高。(P<0.05)③免疫细胞化学方法检测显示：pcDNA-X/QSG7701与pcDNA3.0/QSG7701、未转染的QSG7701细胞相比,DNMT3A/3B蛋白的表达均显著升高(P<0.05)。结论采用人源性永生化非瘤性肝细胞QSG7701为研究对象,建立了HBV-X稳定转染的细胞系pcDNA-X/QSG7701,为进一步探讨HBx在HCC的发生发展过程中所起的作用,提供了一个有价值的细胞模型。HBV-X稳定转染的人源性永生化非瘤性肝细胞QSG7701(pcDNA-X/QSG7701)中DNMT3A/3B mRNA和蛋白的表达均明显升高,提示HBV-X基因在mRNA及蛋白水平能上调转染细胞中DNMT3A/3B的表达,而细胞中DNMT3A/3B表达的增加是否能进一步影响癌基因、抑癌基因的表达水平,从而导致细胞癌变,有待进一步研究。