呼吸道合胞病毒(RSV)是下呼吸道疾病的主要病原体之一,其主要感染对象为婴儿,老年人以及免疫力不健全的成年人。鉴于上述人群的特殊性,以及福尔马林灭活的RSV疫苗曾导致严重的呼吸道疾病增强现象,RSV疫苗的有效性和安全性一直是疫苗研究领域的热点和难点。目前,在预防与治疗方面,尚无获得许可上市的RSV疫苗。在RSV编码的11种蛋白中,融合蛋白(F)具有病毒-宿主膜融合功能,针对该蛋白的抗体可有效抑制病毒入侵。而F蛋白与宿主细胞膜受体发生相互作用后会形成稳定的融合后构象。研究表明融合前F蛋白比融合后F蛋白具有更丰富的有效抗原决定位点,并能诱导具有保护效力的高特异性免疫反应。但与其他亚单位疫苗类似,融合前构象的RSV-F蛋白免疫原性较弱,而且其本身具有体液免疫偏向。为了解决上述问题,本文以具有融合前构象的RSV-F蛋白为抗原,以BALB/c小鼠为动物模型,考察了免疫途径和佐剂对小鼠免疫应答的影响。其中,免疫途径聚焦在临床最为常用的两种途径:肌肉注射和皮下注射。佐剂涵盖氢氧化铝(Alhydrogel)、MF59、AS03、AS02及乙二醇壳聚糖(GCS,Soluble Glycol Chitosan),其中前三种佐剂已在相应上市疫苗中使用。我们的考察范围包括血清学检测(特异性抗体滴度、中和抗体滴度、抗体分型以及血清细胞因子检测)、脾细胞刺激细胞因子检测、全血转录组测序以及攻毒后的肺部病理检测(肺病毒载量以及肺病理切片)。实验结果表明,无论有无佐剂,肌肉注射在免疫原性方面优于皮下注射,肌肉注射低剂量抗原即可以实现与皮下注射10倍剂量抗原相当的特异抗体水平,且无副反应产生。所有佐剂均能提高抗原特异性抗体和病毒中和抗体水平。与其他佐剂相比,AS02能够诱导较高的RSV-F特异抗体水平,且可持续到免疫后18周。而鲨烯纳米乳佐剂AS03和MF59在免疫原性提升方面优于Alhydrogel和GCS。此外,AS02能够增强机体Th1型免疫水平促进Th1/Th2平衡。在攻毒保护实验中,所有佐剂组可不同程度提高小鼠肺部病毒清除率,而AS02组小鼠相对于其他佐剂组显示出更快的病理学恢复进程。进一步的转录组分析结果表明,AS02通过激活TLR-4调节免疫平衡并促进Th1型免疫反应。综上,肌肉注射是更适合的疫苗接种途径,而AS02是重组融合前构象RSV-F亚单位疫苗的优秀候选佐剂。本研究为基于RSV-F蛋白的呼吸道合胞病毒疫苗研究提供了重要事实依据。